本站原创摘要3-5
Abstract5-11
第一章 绪论11-24
1 松子及松子探讨进展11-24
1.1 松子介绍11-17
1.1.1 松属植物的分布12
1.1.2 松子的组成成分12-13
1.1.3 松子的营养价值浅析及功能机理13-17
1.2 松子蛋白酶的提取17-21
1.2.1 植物蛋白酶探讨进展17-18
1.2.2 植物蛋白酶的分类18
1.2.3 蛋白酶的提取纯化策略18-21
1.3 蛋白质的提取策略21-22
1.3.1 水溶液提取法21
1.3.2 有机溶剂提取法21-22
1.3.3 酶法提取22
1.4 本课题的探讨内容、作用22-24
1.4.1 探讨内容22-23
1.4.2 探讨作用23-24
第二章 巴西松子中蛋白酶的分离纯化24-37
1 材料24-25
1.1 试剂24
1.2 仪器24-25
1.3 试剂的配制25
2 策略25-28
2.1 蛋白酶的粗提25
2.2 蛋白酶纯化策略25-27
2.2.1 硫酸铵分级沉淀25-26
2.2.2 DEAE-Sepharose FF凝胶柱纯化26-27
2.3 蛋白浓度的测定-考马斯亮蓝染色法27
2.4 蛋白酶活性的测定27-28
3 结果28-35
3.1 标准曲线绘制28-29
3.1.1 标准蛋白曲线绘制28-29
3.1.2 L-酪氨酸标准曲线29
3.2 巴西松子中蛋白酶的分离提取29-33
3.2.1 缓冲液及pH对蛋白酶活力的影响29-30
3.2.2 提取时间对蛋白酶活力的影响30-31
3.2.3 料液比对蛋白酶活力的影响31-32
3.2.4 交试验确定最佳工艺参数32-33
3.3 西松子蛋白酶的纯化33-35
3.3.1 (NH4)_2SO_4沉淀33-34
3.3.2 DEAE-Sepharose Fast Flow层析34-35
3.3.3 分离纯化效率35
4 浅析与讨论35-36
4.1 缓冲液的选择35-36
4.2 酶液的稀释36
4.3 硫酸铵盐析法36
4.4 阴离子交换剂的选择36
4.5 DEAE-Sepharose FF柱层析36
5 结论36-37
第三章 巴西松子中蛋白酶鉴定及其性质探讨37-45
1 材料37-38
1.1 试剂37
1.2 仪器37-38
2 策略38-40
2.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定分子量38-40
2.1.1 试剂的配置38
2.1.2 制胶38-39
2.1.3 电泳39
2.1.4 固定与染色39-40
2.2 蛋白酶的酶学特性40
2.2.1 酶的热稳定性试验40
2.2.2 最适反应温度试验40
2.2.3 最适pH值试验40
2.2.4 金属离子对酶活性的影响40
3 结果40-43
3.1 SDS-PAGE电泳41
3.2 巴西松子蛋白酶的酶学性质41-43
3.2.1 酶的热稳定性41-42
3.2.2 酶反应的最适温度42
3.2.3 酶反应的最适pH值42-43
3.2.4 金属离子对酶活性的影响43
4 结论43-45
第四章 响应面法优化松子蛋白提取工艺45-56
1 材料与策略45-47
1.1 材料45
1.2 仪器与设备45-46
1.3 实验策略46-47
1.3.1 标准曲线的绘制46
1.3.2 去脂松子粉的准备46
1.3.3 酶法提取蛋白工艺流程46
1.3.4 酶法提取蛋白响应面优化设计46-47
1.4 数据统计47
2 结果与讨论47-54
2.1 标准蛋白曲线绘制47
2.2 酶法提取松子蛋白的单因素试验47-51
2.2.1 pH值对蛋白提取率的影响47-48
2.2.2 料液比对蛋白提取率的影响48-49
2.2.3 提取温度对蛋白提取率的影响49-50
2.2.4 加酶量对蛋白提取率的影响50
2.2.5 提取时间对蛋白提取率的影响50-51
2.3 松子蛋白提取的响应面优化设计51-54
2.3.1 模型的数学浅析51-54
3 结论54-56
第五章 结论与展望56-59
1 结论56-57
2 本探讨的革新点57
3 后续探讨展望57-59