摘要：探讨背景和目的：冠心病是临床常见疾病。三磷酸腺苷(ATP)作用于嘌呤能受体参与信息传递。实验室前期实验表明心肌缺血损伤引起颈上、星状交感神经节嘌呤受体（P2X_2,P2X_3,P2X_(2/3)）表达升高，交感节后神经元活性增强，致血压升高、心率加速等交感兴奋性反射活动。P2X_7受体与多种功能与疾病有关，但颈部交感神经节P2X_7受体与心肌缺血损伤的联系尚未探明。本探讨观察P2X_7受体在心肌缺血引发的交感兴奋反射信息传递中的作用，为冠心病的防治提供新的治疗靶点。策略：运用心肌缺血大鼠模型进行实验。实验大鼠随机分为：生理盐水对照组、结扎冠状动脉心肌缺血模型组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂（oxATP）干预组。实验内容：⑴结扎大鼠左冠状动脉前降支建立大鼠心肌缺血动物模型，通过心电图、心肌HE染色观察心肌缺血模型大鼠心功能和心肌形态的变化确定建模效果；⑵利用无创法血压计测量大鼠的血压和心率，观察心肌缺血大鼠血压、心率的变化，并与生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组比较；⑶检测生理盐水对照组、心肌缺血模型组、检测手术组、结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组大鼠血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）和心肌肌钙蛋白I(cTn-I)四种心脏标志物的含量；⑷免疫荧光双标法观察生理盐水对照组、心肌缺血模型组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组颈上、星状交感神经节细胞和心肌交感神经的P2X_7受体和酪氨酸羟化酶（TH）抗体的共表达情况。⑸免疫组织化学法和蛋白印迹（Western Blot）观察生理盐水对照组、心肌缺血模型组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组颈上、星状交感神经节和心肌的P2X_7受体的表达情况。以及用Western Blot观察各组细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2的蛋白表达情况。⑹原位核酸分子杂交试验观察生理盐水对照组、心肌缺血模型组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组颈上、星状交感神经节的P2X_7受体mRNA表达的变化。（7）ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化结果：⑴大鼠心脏左冠状动脉前降支结扎后，心电图即显示ST段呈弓背抬高，心肌缺血模型组分别于7天和30天后，观察心电图出现深大的病理性Q波，HE染色可见心肌萎缩、心肌纤维化、出血灶或坏死病灶，大体可见大面积结缔组织增生现象和代偿性心肌肥大。结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组大鼠心电图的异常变化和心肌损伤得到改善。⑵心肌缺血模型组大鼠收缩压、舒张压、心率与生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组相比均增加(n=5)(p0.05)。结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组大鼠收缩压、舒张压、心率与生理盐水对照组、检测手术组间无显著差别(n=5)(p0.05)。⑶心肌缺血模型组的CK-MB、CK、LDH和cTn-I浓度与生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组相比显著增加(n=5)(p0.05)。⑷免疫荧光双标法结果显示大鼠颈上、星状交感神经节细胞和心肌交感神经P2X_7受体和酪氨酸羟化酶（TH）抗体的共表达情况，心肌缺血模型组P2X_7受体和TH受体表达显著高于生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组。⑸免疫组织化学染色结果显示心肌缺血模型组大鼠颈上、星状交感神经节细胞P2X_7受体表达高于生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组(n=10)(p0.05)。结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组、检测手术组与生理盐水对照组之间无显著差别(n=10)(p0.05)。⑹Western blotting结果显示在β-actin标化后心肌缺血模型组大鼠颈上、星状交感神经节和心肌P2X_7受体蛋白表达显著高于生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组(n=10)(p0.05)。结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组、检测手术组与生理盐水对照组之间无显著差别(n=10)(p0.05)。心肌缺血模型组大鼠颈上、星状交感神经节磷酸化ERK1/2的蛋白表达显著高于生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组(n=10)(p0.05)。结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组、检测手术组与生理盐水对照组之间无显著差别(n=10)(p0.05)。各组之间ERK1/2的总蛋白表达无显著差别(n=10)(p0.05)。⑺原位核酸分子杂交试验结果显示心肌缺血模型组大鼠颈上、星状交感神经节P2X_7受体mRNA的表达高于生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组(n=10)(p0.05)。结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组、检测手术组与生理盐水对照组之间无显著差别(n=10)(p0.05)。（8）ELISA试剂盒检测7天和30天各组大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度结果显示，心肌缺血组血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量显著高于生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组(p0.05)；生理盐水对照组、检测手术组和结扎冠状动脉P2X_7受体拮抗剂干预组之间无显著差别(p0.05)。结论：心肌缺血大鼠颈上、星状交感神经节和心肌交感神经P2X_7受体表达升高，P2X_7受体拮抗剂干预后抑制心肌缺血大鼠颈上、星状交感神经节及心肌交感神经P2X_7受体激活，进而阻断颈部交感神经兴奋信息传递，使心肌缺血损伤大鼠增高的血压降低、加速的心率减慢。由此，大鼠颈上、星状交感神经节和心肌交感神经P2X_7受体参与心肌缺血伤害性信息引发的交感兴奋反射历程。关键词：P2X_7受体论文交感兴奋反射论文颈上神经节论文星状神经节论文P2X_7受体拮抗剂论文
摘要3-6
ABSTRACT6-12
中英文缩略词表12-14
第1章 引言14-16
第2章 材料与策略16-27
2.1 材料16-22
2.1.1 动物16
2.1.2 主要试剂16-17
2.1.3 主要仪器17-18
2.1.4 溶液配制18-22
2.2 策略22-27
2.2.1 实验动物的分组22
2.2.2 大鼠心肌缺血模型建立22
2.2.3 大鼠血压、心率测定22-23
2.2.4 心肌 HE 染色23
2.2.5 心肌酶测定23
2.2.6 免疫荧光双标法23-24
2.2.7 免疫组织化学24
2.2.8 蛋白印迹24-25
2.2.9 原位核酸分子杂交试验25-26
2.2.10 ELISA 实验步骤26
2.2.11 统计策略26-27
第3章 结果27-54
3.1 血压、心率及心电图的变化27-29
3.1.1 7 天血压和心率变化27
3.1.2 30 天血压和心率的变化27-28
3.1.3 心电图变化28-29
3.2 心肌结构及心肌酶变化29-31
3.2.1 心肌 HE 染色29
3.2.2 心肌酶29-31
3.3 免疫荧光双标31-36
3.3.1 颈上神经节荧光双标(P2X_7和 TH)31-32
3.3.2 星状神经节荧光双标法(P2X_7和 TH)32-34
3.3.3 心肌荧光双标法(P2X_7和 TH)34-36
3.4 免疫组织化学36-39
3.4.1 颈上神经节 P2X_7免疫组化法36-37
3.4.2 星状神经节 P2X_7免疫组化法37-39
3.5 蛋白印迹39-47
3.5.1 颈上神经节 P2X_7的蛋白表达39-40
3.5.2 星状神经节 P2X_7的蛋白表达40-41
3.5.3 心肌 P2X_7的蛋白表达41-47
3.6 原位杂交法47-50
3.6.1 颈上神经节 P2X_7原位杂交法47-48
3.6.2 星状神经节 P2X_7原位杂交法48-50
3.7 ELISA 检测法50-54
第4章 讨论54-57
第5章 结论57-58
致谢58-59
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