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摘要：目的为了探讨金黄扶正散对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,本研究建立免疫抑制小鼠模型,观察金黄扶正散对免疫抑制小鼠免疫器官、抗应激能力、抗自由基和免疫细胞功能等的影响,并作用机制研究,为其临床应用依据。方法1 SPF级昆明种小鼠60只,14-18g,随机分为六组,分别为：正常对照组(生理盐水灌胃0.2mL/10g,连续10天)；环磷酰胺组(生理盐水灌胃0.2mL/10g,连续10天,同时隔天皮射环磷酰胺30mg/kg)；阳性对照组(每天灌胃左旋咪唑剂25 mg/kg,连续10天,给药后隔天皮射环磷酰胺30mg/kg)；金黄扶正茶高、中、低剂量组(每天分别灌胃金黄扶正茶5.08g/kg、2.54g/kg、1.27 g/kg,连续10天,给药后隔天皮射环磷酰胺30mg/kg),建立免疫功能低下小鼠模型。末次给药后小鼠禁食12h,处死,分别取胸腺,脾脏称重,计算胸腺、脾脏指数。将脾脏制成组织匀浆,离心,取上清,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定和酸性磷酸酶(ACP)活性测定。2造模及给药方法同1,分别负重游泳实验、耐高温实验、耐低温实验、常压耐缺氧实验和亚硝酸盐中毒性耐缺氧实验。游泳实验观察其游泳时间,其余各实验观察存活时间。3造模及给药方法同1,取小鼠脾脏制成组织匀浆,离心,取上清,测定总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)。4造模及给药方法同1,四偶氮唑蓝(MTT)法,测定刀豆蛋白A (ConA)诱导脾脏T淋巴细胞增殖和脂多糖(LPS)诱导B淋巴细胞增殖的影响,测定自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴因子激活的杀伤细胞(L细胞)活性,检测巨噬细胞吞噬中性红能力和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。5造模及给药方法同1.1,末次用药后小鼠禁食12h,各组小鼠尾静脉取血1mL,离心,取血清备用,细胞因子抗体芯片细胞因子定量检测。6造模及给药方法同1.1,小鼠处死后,取脾,立即置液氮中,随后转移置-80℃低温冰箱保存,实时荧光定量PCR (FQ-PCR)方法检测脾脏T-bet、GATA mRNA的表达。7造模及给药方法同1.1,小鼠处死后,取脾,4%多聚甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况。8FQ-PCR方法检测脾脏Bcl-2、Bax、Fas和FasL mRNA的表达。结果1与正常对照组比较,环磷酰胺组胸腺指数,脾脏指数降低(P0.05),给药后,金黄扶正散中、高剂量组可提高免疫抑制小鼠的胸腺指数、脾脏指数(P0.01,P0.05)。与正常对照组比较,环磷酰胺组可降低LDH、ACP的活性(P0.01)；给药后,金黄扶正散低、中、高剂量组可提高免疫抑制小鼠的LDH活性和ACP活性(P0.01,P0.05)。2与正常对照组比较,环磷酰胺组负重游泳时间减少(P0.05),耐高温存活时间减少(P0.01),耐低温存活时间减少(P0.01),在常压缺氧条件下的存活时间减少(P0.01),亚硝酸盐中毒性缺氧下存活时间减少(P0.01)；给药后与模型组比较,金黄扶正散中、高剂量组能延长负重游泳时间(P0.05),金黄扶正散低、中剂量组能延长耐高温存活时间(P0.01),金黄扶正散低、中剂量组可提高小鼠的耐低温存活时间(P0.05),金黄扶正散低、高剂量组能延长常压耐缺氧存活时间(P0.01),金黄茶中剂量组能延长亚硝酸盐中毒性缺氧存活时间(P0.01)。3与正常对照组比较,环磷酰胺组可降低T-AOC能力(P0.01),降低CAT、SOD、GSH-PX的活性(P0.05,P0.01)；提高MDA含量(P0.05)。给药后,金黄扶正散中、高剂量组可提高免疫抑制小鼠的T-AOC能力(P0.01)；金黄扶正散高剂量组可提高免疫抑制小鼠的CAT、SOD、GSH-PX的活性(P0.05,P0.01)；金黄扶正散中、高剂量组可降低免疫抑制小鼠的MDA含量(P0.05,P0.01)。4与环磷酰胺组比较,金黄扶正散低、中、高剂量组均能提高免疫抑制小鼠的T、B淋巴细胞增殖能力(P0.01)；金黄扶正散中、高剂量组能提高免疫抑制小鼠NK细胞、L细胞活性(P0.01,P0.05)；金黄扶正散高剂量组能性提高免疫抑制小鼠的CD3+淋巴细胞数(P0.05),金黄扶正散中、高剂量组能性提高免疫抑制小鼠的CD4’淋巴细胞数(P0.01),金黄扶正散低、中、高剂量组降低CD8+淋巴细胞数和提高CD4+/CD8+比值(P0.01,P0.05)；金黄扶正散中、高剂量组可提高腹腔巨噬细胞吞噬能力(P0.05)；金黄扶正散低、中、高剂量组可提高巨噬细胞iNOS活性(P0.01,P0.05)。5与正常对照组比较,环磷酰胺组的2种细胞因子IFN-Y和RANTES呈性降低(P0.05),金黄扶正散低、中、高剂量组给药后IFN-γ有性提升,高剂量组的RANTES呈性升高(P0.05)；与对照组比较,环磷酰胺组的5种细胞因子IL-5、IL-6、IL-9、IL-13和MCP-1呈性升高(P0.01,P0.05),给药组给药后有不同降低(P0.01,P0.05)；13种细胞因子GM-C、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-10、IL-12、IL-17、M-C、TNF-α、KC和VEGF无变化(P0.05)。6与环磷酰胺组比较,金黄扶正散低、中、高剂量组的T-bet mRNA表达量呈性提高而GATA mRNA表达量呈性降低(P0.01)。7与正常对照组比较,环磷酰胺组凋亡指数性提高(P0.05)；金黄扶正散中、高剂量组凋亡指数与环磷酰胺组比较性下降(P0.01,P0.05)。金黄扶正散低剂量凋亡指数与环磷酰胺组比较无差异(P0.05)。8与环磷酰胺组比较,金黄扶正散中、高剂量组的bcl-2 mRNA表达量呈性提高(P0.01),bcl-2/ bax mRNA比值呈性降低(P0.01,P0.05)。与环磷酰胺组比较,金黄扶正散中、高剂量组的Fas和FasL mRNA表达量均呈性降低(P0.01,P0.05)。：1免疫抑制剂环磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型,造模后小鼠胸腺指数、脾指数下降,金黄扶正散可提高免疫抑制小鼠的胸腺指数、脾脏指数,提高免疫抑制小鼠的LDH和ACP活性,激活巨噬细胞的活化。2金黄扶正散可延长免疫抑制小鼠负重游泳时间,提高其耐高温、低温、常压耐缺氧、亚硝酸盐中毒性缺氧的存活时间,提高免疫抑制小鼠抗应激的能力。3金黄扶正散可提高免疫抑制小鼠CAT、T-SOD、GSH-PX的活性提高T-AOC能力,降低MDA含量,调节体内抗氧化酶的和自由基,改善机体的氧化还原。4金黄扶正散能提高免疫抑制小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力；提高免疫抑制小鼠NK细胞和L细胞杀伤活性；提高免疫抑制小鼠外周血CD3+和CD4+/CD8+比值；提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性及iNOS活力,从而提高免疫抑制小鼠的细胞免疫功能。5小鼠血清中细胞因子的变化提示,免疫抑制小鼠的Th1细胞向Th2细胞偏移,Thl/Th2亚群失衡,金黄扶正散对免疫抑制小鼠Thl/Th2亚群的调节,可能是提高免疫抑制小鼠脾脏T-bet mRNA的表达和降低GATA mRNA的表达来实现的。6金黄扶正散可抑制免疫抑制小鼠脾细胞凋亡,降低凋亡指数,其机制可能是促进bcl-2 mRNA的表达、提高bcl-2/bax的比值,抑制Fas与FasL mRNA的表达,影响线粒体、死亡受体依赖的凋亡途径来实现的。关键词：金黄扶正散论文免疫抑制小鼠论文自然杀伤细胞论文淋巴因子激活的杀伤细胞论文抗体芯片论文T-bet论文GATA论文bcl-2/bax论文Fas/FasL论文
主要縮略语7-9
摘要9-14
Abstract14-20
前言20-22
章 金黄扶正散对免疫抑制小鼠免疫调节作用的研究22-63
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠免疫器官、乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶活性的影响22-30
1 22-23
2 方法23-25
3 结果25-26
4 讨论26-29
5 小结29-30
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠抗应激能力的影响30-37
1 30-31
2 方法31-32
3 结果32-33
4 讨论33-36
5 小结36-37
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠抗氧化功能的影响37-47
1 37-38
2 方法38-42
3 结果42-43
4 讨论43-46
5 小结46-47
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠免疫细胞的影响47-63
1 47-48
2 方法48-51
3 结果51-57
4 讨论57-62
5 小结62-63
章 金黄扶正散对免疫抑制小鼠免疫调节作用的机制研究63-106
节 抗体芯片技术检测金黄扶正散对免疫抑制小鼠细胞因子的影响63-74
1 63-64
2 方法64-68
3 结果68-70
4 讨论70-73
5 小结73-74
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠脾脏T-bet、GATA-3mRNA表达的影响74-86
1 74-75
2 方法75-78
3 结果78-81
4 讨论81-85
5 小结85-86
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠脾细胞凋亡的影响86-93
1 86-87
2 方法87-88
3 结果88-90
4 讨论90-93
节 金黄扶正散对免疫抑制小鼠脾脏Bcl-2、Bax、Fas和FasL mRNA表达的影响93-106
1 93-94
2 方法94-96
3 结果96-101
4 讨论101-105
5 小结105-106
106-107