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摘要：目的：细胞凋亡的紊乱与肿瘤的发生进展有着密切的联系,PI3K/T信号通路在广泛的人类肿瘤谱中失调,其可通过调节下游效应分子影响细胞凋亡来推动肿瘤细胞的增殖,凋亡抑制蛋白家族也是通过抑制细胞凋亡来推动肿瘤细胞的增殖。而在卵巢癌中,PI3K/T、XIAP、cIAP2的高表达与肿瘤发生、耐药有着一定的联系,但是关于三者在卵巢癌中的调控机制的探讨目前尚未见报道。本实验运用PI3K特异性抑制剂LY294002作用卵巢癌细胞株NIH：OVCAR-3后,观察细胞增殖情况、凋亡的转变及对XIAP和cIAP2的影响,以探讨XIAP、cIAP2表达水平与PI3K／T的联系,为肿瘤的靶向治疗奠定论述基础。策略：探讨对象为人卵巢癌细胞NTHOVCAR-3.首先在37℃,5%C02,20%02和95%湿度条件下二氧化碳培养箱中培养卵巢癌细胞,提取生长指数期细胞,分别用于以下各步试验。(1)以不同浓度(0、5、10、20、40ummol/L)的LY294002作用于细胞,并于24h、48h、72h、96h收集细胞,MTT法、流式细胞术AnnexinV-FITC检测不同浓度、不同时间LY294002作用于卵巢癌细胞NIHOVCAR-3后各组细胞的增殖情况及凋亡转变。(2)RT-PCR、Western Blot检测LY29400240umol/L作用细胞48小时PI3KmRNA、T mRNA及PI3K、KT蛋白质的情况,观察LY294002抑制PI3K的效果。同时检测PI3K/T受抑制后XIAP mRNA、cIAP2mRNA及XIAP、cIAP2蛋白质转变情况。(3)实验数据用SPSS17统计软件处理。结果：(1)不同浓度(5、10、20、40ummol/L)LY294002对卵巢癌细胞NIHOVCAR-3存活率的影响：24h时细胞存活率分别为92.27%、91.32%、84.86%、71.84%；48h时细胞存活率分别为91.4%、87.56%、82.8%、66.83%；72h时细胞存活率分别为88.79%、84.87%、79.21%、66.74%；96h时细胞存活率分别为88.62%、81.83%、74.66%、55.4%。5ummol/L LY294002随着作用时间的延长,细胞增殖活性并无显著转变,统计学比较无差别(P0.05)；而10、20、40ummol儿LY294002随着作用时间的延长,细胞存活率下降,各组比较有统计学差别(p0.05)。5、10ummol/L LY294002作用24h对细胞增殖活性无影响(P0.05)：而在48h、72h、96h时随着LY294002浓度的增加,细胞存活率减少,各组比较有统计学差别(p0.05)。(2)LY294002不同浓度5、10、20、40ummol/L对卵巢癌细胞NTH：OVCAR-3凋亡的影响：24h时凋亡率分别为1.54%、2.2%、2.48%、3.37%、5.13%；48h时凋亡率分别为2.35%、6.51%、7.28%、9.62%、10.49%；72h时凋亡率分别为2.98%、6.78%、7.73%、9.22%、12.14%；96h时凋亡率分别为3.64%、7.23%、8.21%、11.57%、15.43%。相同浓度时,随着作用时间的延长,细胞凋亡率增加,其差别有统计学作用(p0.05)；5、10ummol/L LY294002作用24小时后细胞凋亡率无显著转变,差别无统计学作用(p0.05),而在48h、72h、96h时随着LY294002浓度的增加,细胞凋亡率增加,其差别有统计学作用(p0.05)。(3)LY29400240ummol/L对卵巢癌细胞NIH：OVCAR-3作用48小时后,PI3KmRNA相对表达含量空白组为197.21±53.31、实验组为52.96±5.49,实验组比空白组相对表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)T2mRNA相对表达含量空白组为159.86±50.81、实验组为65.99±1.14，实验组比空白组相对表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)：XIAP mRNA相对表达含量空白组为173.89±44.20、实验组为61.48±15.63,实验组比空白组相对表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)；cIAP2mRNA相对表达含量空白组为168.33±23.19、实验组为60.71±9.39,实验组比空白组相对表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)。(4)LY29400240ummol/L对卵巢癌细胞NIH：OVCAR-3作用48小时后,PI3K蛋白表达含量空白组为25.53±1.21、实验组为9.45±0.88,实验组比空白组蛋白表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)；T蛋白表达含量空白组为34.75±2.33、实验组为13.03±1.47，实验组比空白组蛋白表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)；XIAP蛋白表达含量空白组为3.18±0.18、实验组为0.84±0.01,实验组比空白组蛋白表达量低,其差别有统计学作用(p0.05)；cIAP2蛋白表达含量空白组为6.90±1.15、实验组为2.18±0.84,实验组比空白组蛋白表达量低,其差别有统计学作用(P0.05)。结论：(1)LY294002可抑制PI3K,下调T的表达,而使NIHOVCAR-3细胞增殖减少,凋亡增加。(2)PI3K/T信号通路的下调可使凋亡抑制蛋白XIAP mRNA、cIAP2mRNA相对表达量减少,蛋白表达量也减少,细胞凋亡增加,抑制细胞的生长活性。可见,卵巢癌细胞NIHOVCAR-3中XIAP、cIAP2表达水平受PI3K/T通路的调控。关键词：卵巢癌论文LY294002论文PI3K/T通路论文XIAP论文cIAP2论文
英文缩略词表4-5
中文摘要5-7
Abstract7-10
前言10-12
材料与策略12-21
结果21-27
讨论27-29
结论29-30