本站原创摘要5-7
ABSTRACT7-11
综述部分11-20
1 防御素的生物学活性及其作用机理11-14
1.1 防御素的生物学活性11-12
1.2 防御素的作用机理12-14
2 β-防御素的探讨进展14-17
2.1 β-防御素的分子结构和分布14-16
2.2 β-防御素的基因工程探讨进展16-17
3 防御素的运用近况17-19
3.1 在医药行业的运用17
3.2 在食品行业的运用17-18
3.3 在农业上的运用18
3.4 在畜牧业上的运用18-19
4 主要探讨内容19-20
4.1 Gal-6原核工程菌的构建及表达制备19
4.2 Gal-1真核工程菌的构建及高拷贝筛选19-20
第一部分 重组Gal-6在E.cop中的表达、纯化和抗菌活性探讨20-41
1 实验材料20-22
1.1 实验动物20
1.2 菌株与载体20
1.3 主要工具酶及试剂盒20
1.4 其他相关试剂20
1.5 主要溶液及培养基的配制20-21
1.6 仪器设备21-22
2 实验策略22-31
2.1 Gal-6的克隆22-27
2.2 表达载体的构建27-28
2.3 重组质粒转化BL2128
2.4 融合蛋白的表达和纯化28-31
3 实验结果31-39
3.1 总RNA的提取31
3.2 Gal-6基因片段的RT-PCR31-32
3.3 pMD-18-Gal-6克隆载体的构建32-33
3.4 pET-28a-Gal-6表达载体的构建33-34
3.5 融合蛋白的表达34-37
3.6 融合蛋白的纯化37-38
3.7 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度38
3.8 活性检测38-39
4 讨论39-41
4.1 Gal-6的克隆39
4.2 重组蛋白的表达形式39
4.3 融合蛋白的表达条件探讨39
4.4 融合蛋白的变复性39-40
4.5 融合蛋白的纯化40
4.6 活性检测40-41
第二部分 Gal-1真核表达载体的构建及高拷贝的筛选41-53
1 实验材料41-42
1.1 实验动物41
1.2 菌株与载体41
1.3 主要工具酶及试剂盒41
1.4 其他相关试剂41
1.5 主要溶液及培养基的配制41
1.6 仪器设备41-42
2 实验策略42-47
2.1 Gal-6的克隆42-44
2.2 表达载体的构建44
2.3 质粒的大量抽提和单酶切44-45
2.4 GS115感受态的制备和电转化45-46
2.5 高拷贝重组子的筛选46-47
2.6 重组子表型的鉴定47
3. 实验结果47-51
3.1 Gal-1基因片段的RT-PCR47-48
3.2 pMD-18-Gal-1克隆载体的构建48
3.3 pPIC3.5K-Gal-1表达载体的构建48-49
3.4 重组质粒的电转化49
3.5 高拷贝重组子的筛选49-51
3.6 重组子表型的鉴定51
4 讨论51-53
4.1 Gal-1的克隆51
4.2 表达载体的选择51
4.3 重组质粒的线性化51
4.4 电转化51-52
4.5 高拷贝重组子的筛选52
4.6 重组子表型的鉴定52-53