谈述布鲁氏菌流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位鉴定学术

摘要8-9

Abstract9-10

1 引言10-19

1.1 布鲁氏菌病概述10-15

1.1.1 布鲁氏菌的生物学特性10-11

1.1.2 布鲁氏菌病流行病学11

1.1.3 诊断11-15

1.1.4 布鲁氏菌病的防制15

1.2 布鲁氏菌BP26蛋白的探讨进展15-17

1.2.1 布鲁氏菌BP26蛋白的特点15-16

1.2.2 布鲁氏菌BP26蛋白作为诊断抗原的作用16-17

1.2.3 布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位探讨17

1.3 探讨的目的与作用17-19

2 材料与策略19-33

2.1 材料19

2.1.1 质粒、菌种19

2.1.2 试剂、血清及抗体19

2.1.3 主要仪器设备19

2.2 策略19-33

2.2.1 流产布鲁氏菌BP26基因的克隆、表达及抗原性鉴定19-23

2.2.2 兔抗BP26蛋白多克隆抗体的制备23

2.2.3 BP26蛋白B细胞线性抗原表位的第一轮鉴定23-26

2.2.4 BP26蛋白B细胞线性抗原表位的第二轮鉴定26-28

2.2.5 BP26蛋白B细胞线性抗原表位的第三轮鉴定28-32

2.2.6 BP26蛋白B细胞线性抗原表位的第四轮鉴定32-33

3 结果与浅析33-47

3.1 流产布鲁氏菌BP26基因的克隆、表达及抗原性鉴定33-35

3.1.1 流产布鲁氏菌BP26基因片段的PCR扩增结果33

3.1.2 克隆载体pMD18-T-BP26构建及序列测定33-34

3.1.3 原核表达载体pET-32a-BP26的构建34

3.1.4 流产布鲁氏菌BP26基因在大肠杆菌中的诱导表达34

3.1.5 BP26基因表达蛋白的Western blot鉴定34-35

3.2 兔抗BP26蛋白多克隆抗体效价的测定结果35-36

3.3 流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的初步鉴定36-38

3.3.1 流产布鲁氏菌BP26 1-3基因的PCR扩增结果36

3.3.2 克隆载体pMD18-T-BP26 1-3的构建36-37

3.3.3 原核表达载体pET-32a- BP26 1-3的构建37-38

3.3.4 流产布鲁氏菌BP26 1-3基因的诱导表达38

3.3.5 流产布鲁氏菌BP26 1-3基因表达蛋白的Western blot浅析38

3.4 流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的第二轮鉴定38-41

3.4.1 原核表达载体pET-32a-BP26 2.1-2.5的构建38-39

3.4.2 流产布鲁氏菌BP26 2.1-2.5在大肠杆菌中的诱导表达与纯化39-40

3.4.3 流产布鲁氏菌BP26 2.1-2.5表达蛋白的Western blot浅析40-41

3.5 流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的第三轮鉴定41-43

3.5.1 原核表达载体pET-32a-BP26 2.4.1-2.4.6的构建41-42

3.5.2 流产布鲁氏菌BP26 2.4.1-2.4.6在大肠杆菌中的诱导表达与纯化42

3.5.3 流产布鲁氏菌BP26 2.4.1-2.4.6表达蛋白的Western blot浅析42-43

3.6 流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的第四轮鉴定43-47

3.6.1 原核表达载体pET-32a- BP26 2.4.a-2.4.i的构建43-44

3.6.2 流产布鲁氏菌BP26 2.4.a-2.4.i在大肠杆菌中的诱导表达与纯化44

3.6.3 流产布鲁氏菌BP26 2.4.a-2.4.i表达蛋白的Western blot浅析44-47

4 讨论47-49

4.1 选择流产布鲁氏菌BP26蛋白进行表位鉴定的依据47

4.2 布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的预测47

4.3 小于20个氨基酸的短肽的克隆策略47-48

4.4 抗原表位作图法的选择和确定48

4.5 流产布鲁氏菌BP26蛋白B细胞线性表位的鉴定48-49

5 结论49-50

致谢50-51