本站原创摘要4-6
ABSTRACT6-8
目录8-11
缩略语表11-13
1 文献综述13-19
1.1 肝再生探讨进展13-16
1.1.1 肝再生13
1.1.2 肝再生的细胞生物学特点13-14
1.1.3 肝再生的细胞周期调控14-16
1.2 胰腺炎相关蛋白(PAP)的探讨进展16-17
1.2.1 PAP 的结构与分布16
1.2.2 PAP 与肝再生16-17
1.3 本论文的探讨目的和作用17-19
1.3.1 探讨目的17
1.3.2 探讨作用17-19
2 pap 基因对肝癌细胞 BEL-7402 的作用探讨19-59
2.1 引言19
2.2 实验材料和策略19-41
2.2.1 主要仪器与试剂19-22
2.2.2 菌株、载体和细胞株22
2.2.3 实验动物22
2.2.4 大鼠 2/3 肝切除模型制作22
2.2.5 pap 基因的克隆22-27
2.2.6 pap 表达载体的构建27-29
2.2.7 pap 干涉片段的制备29-30
2.2.8 pap 干涉载体的构建30-32
2.2.9 pap 检验载体的构建32-33
2.2.10 小鼠肝脏的液压转基因33-34
2.2.11 质粒的制备与纯化34
2.2.12 细胞培养与脂质体转染34-35
2.2.13 稳定转基因/siRNA 细胞系的筛选35
2.2.14 细胞爬片 HE 染色35-36
2.2.15 计数法测定细胞生长曲线36-37
2.2.16 MTT 检测37-38
2.2.17 PCNA 的细胞免疫化学检测38-40
2.2.18 Hoechst33258 染色40
2.2.19 集落形成率检测40
2.2.20 统计学浅析40-41
2.3 结果41-56
2.3.1 pap 基因的克隆结果41-42
2.3.2 表达载体 pEGFP-N1-pap 的检测结果及质粒图谱42-44
2.3.3 干涉载体 pGenesil-1.0-pap(289)和 pGenesil-1.0-pap(485)的检测结果及质粒图谱44-46
2.3.4 检验载体 pGenesil-1.0-pap(289)-pap、-pap(485)-pap 和-HK-pap 的检测结果及质粒图谱46-47
2.3.5 最佳干涉载体的筛选结果47-48
2.3.6 稳定转基因/siRNA 细胞株的鉴定结果48-49
2.3.7 pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 细胞形态的影响49-50
2.3.8 pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 细胞生长的影响50-51
2.3.9 pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 细胞活性的影响51
2.3.10pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 细胞增殖的影响51-53
2.3.11 pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 细胞凋亡的影响53
2.3.12 pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 集落形成率的影响53-54
2.3.13 pap 及其 siRNA 对肝癌细胞 BEL-7402 细胞耐药性的影响54-56
2.4 讨论56-59
3 pap 基因对大鼠肝再生的作用探讨59-71
3.1 引言59
3.2 实验材料与实验策略59-63
3.2.1 主要仪器和主要试剂59
3.2.2 菌株、载体和实验动物59-60
3.2.3 大鼠 2/3 肝切除模型制作60
3.2.4 质粒的大量制备60
3.2.5 大鼠肝脏的液压转基因60-61
3.2.6 转基因后大鼠的死亡率61
3.2.7 转基因后肝组织的显微结构观察61-63
3.2.8 转基因后大鼠肝系数检测63
3.2.9 转基因后大鼠肝再生率检测63
3.2.10 统计学浅析63
3.3 结果63-69
3.3.1 表达载体、干涉载体在大鼠肝内的表达动力学63-65
3.3.2 转目的质粒后大鼠肝组织结构变化65-66
3.3.3 转目的质粒后大鼠死亡率66-67
3.3.4 转目的质粒后对大鼠再生肝生长的影响67-69
3.4 讨论69-71
结论71-73