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[摘要]塞络通（SLT）是由人参、银杏叶、西红花组方，主治血管性痴呆的现代复方中药。为探讨SLT药效物质基础，并为给药方案提供依据，该文对治疗剂量SLT给与大鼠后，人参皂苷成分的血药浓度、药代特征、以及脑分布进行了研究。实验建立了同时检测生物样品中7种人参皂苷的高灵敏度LC-MS/MS分析策略，经过对线性、专属性、回收率、准确度、精密度的考察，所建立的分析策略符合临床前药代动力学研究要求。灌胃SLT 60 mg·kg-1后，7种目标成分均在大鼠血浆中检出，其中二醇型皂苷比三醇型的皂苷有更高的血药浓度和更长的消除半衰期。血浆中人参皂苷Rg1，Re，Rb1，Rb2/b3，Rc，Rd的平均消除半衰期分别为15.26，2.46，18.41，27.70，21.86，61.58 h；平均峰浓度分别为7.15，2.83，55.32，30.22，21.42，8.81 μg·L-1。SLT给药后人参皂苷成分能够迅速进入脑组织，但是随时间下降很快。人参皂苷Rg1，Re，Rb1，Rc脑组织中含量较高的成分。研究结果显示服用SLT后，人参皂苷成分能够快速吸收入血并进入脑组织。人参皂苷，尤其是Rg1，Re可通过快速进入脑组织直接作用于神经细胞发挥作用；以二醇型为主的人参皂苷在血浆中长时间滞留，连续给药方式时会累计达到较高稳态血药浓度，它们可能是通过对外周的药理作用保护脑组织的主要成分。
[关键词]塞络通；人参皂苷；LC-MS/MS；药代动力学；脑分布
[收稿日期]2013-08-26
[基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项（2012ZX09101214）；北京市科技计划项目（Z121102001112006）；国家自然科学基金项目（81072929）
[通信作者]*刘建勋，研究员，中药药理方向，Tel：（010）62874049， E-mail：jianxun_liu@16
人参是该复方中的君药，其主要成分为人参皂苷。近代药理研究表明人参皂苷成分具有多种脑保护作用。例如人参皂苷Rg1（G-Rg1）能够减轻老年痴呆模型大鼠的记忆损伤[4]；人身皂苷Rb1和Rd都具对脑缺血损伤的神经保护作[5-6]。为探讨SLT药效物质基础，并为给药方案提供依据，本实验对治疗剂量塞络通给予大鼠后人参皂苷成分在体内的血药浓度、药代特征、以及在脑组织分布进行了研究。
1材料
2策略与结果
质谱条件：离子源为ESI源。气帘气体为103.425 kPa。源内温度 600 ℃。源内气体GS1：413.7 kPa。源内气体GS2：60 413.7 kPa。离子喷射电压（IS）：5 000 V。碰撞气（CAD）： High。检测方式：正离子检测。扫描方式：多反应监测（MRM）方式，用于定量分析的离子及其质谱参数，见表1。
表1人参皂苷成分定量离子及质谱参数
Table 1Ion transitions and mass spectrum parameters for the quantitation of ginsenosides
2.8.3回收率在标准曲线范围内选择低、中和高3种浓度，以空白血浆配制各人参皂苷3个浓度的QC样品，每个浓度点5份样品，同时配制相同浓度以检测流动相为基质的标准溶液。将相同浓度的样品在同1 d按照样品处理策略与处理后分析，每份样品进样1次。同时将未经预处理的同浓度标准溶液以同样策略分析。以QC样品峰面积和标准溶液峰面积相比计算回收率，3种浓度下的大鼠血浆中各人参皂苷成分的回收率基本一致，平均值分别为62.9% （G-Rg1），58.4%（G-Re），20.8% （G-Rb1），38.5% （G-Rb2），17.0%（G-Rc），30.4%（G-Rd）。2.8.4精密度和准确度按“血浆样品处理”项下操作，应用大鼠空白血浆，配制各人参皂苷新型范围内低、中、高3个浓度的质量制约（QC）样品，每个浓度5份，并根据标准曲线计算QC样品的测得浓度，与配制浓度对照，求得测定策略的准确度与精密度。考察结果显示测定策略的准确度在92.5%～11
大鼠灌胃给予塞络通60 mg·kg-1后，测得各人参皂苷成分在脑组织中的含量随时间变化见图2所示。可以看到所有待测人参皂苷成分均能够进入在脑组织，但是随时间下降很快，到7 h时只有G-Rg1有微量检出外，其他人参皂苷均未能检出。8种人参皂苷中G-Rg1，Re，Rb1，Rc和是含量较高的成分。
A.G-Rg1； B.G-Re ；C.G-Rb1； D.G-Rb2/Rb3； E.G-Rc； F.G-Rd。
图1大鼠灌胃给与SLT 60 mg·kg-1后，各人参皂苷成分血药浓度-时间图（n=6）
Fig.1Plaa concentration-time curves of ginsenosides after administration of SLT at dose of 60 mg·kg-1（n=6）
表2大鼠灌胃给与SLT 60 mg·kg-1后，各人参皂苷成分药代动力学参数 （n=6）
Table 2pharmacokinetic parameters of ginsenosides after administration of SLT at dose of 60 mg·kg-1 （n=6）
3讨论
已有文献研究表明人参皂苷成分的生物利用度低，因此对这类成分的检测需要建立高灵敏度的分析策略。近年来基本采用液质联用策略实现对这类成分的体内分析。通过比较目标人参皂苷在正、负离子源中的质谱裂解行为，选择了信号更为稳定的ESI+源。此外，实验中发现这些目标人参皂苷的一级离子中加钠离子的信号远强于加氢离子，并且离子信号很稳定。为获得更高灵敏度，测定时选择各人参皂苷M+Na→碎片离子作为定量离子对。所分析人参皂苷成分中，G-Rb2和G-Rb3是立体差向异构体，普通的反相分析柱上无法分离，因此在该位置出现的峰应是两者之和。此外，G-Rc和G-Rb2/b3也是同分异构体，在色谱柱上的保留行为相似，经过对流动相和分析柱优化比较，最终采用较长的分析柱和缓梯度实现峰位的良好分离。经策略学确证，证明该分析策略的准确度、精密度及线性等均符合药代动力学定量要求，且灵敏度较Zhou等[8]建立的多皂苷分析策略更为灵敏，能满足在较低口服给药剂量下，对大鼠血浆中多种人参皂苷成分的分析要求。
图2大鼠灌胃给与SLT 60 mg·kg-1后，在不同时间点各人参皂苷成分在脑组织中的含量（n=6）
Fig.2Brain distribution of ginsenosides at different time points af塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布由专注毕业论文与职称论文的www.udooo.com提供,转载请保留.ter administration of SLT at dose of 60 mg·kg-1 （n=6）
塞络通灌胃给与大鼠后，7种人参皂苷均能进入血循环，并且显示出血药浓度和皂苷的结构类型相关性很强的特征。尽管在SLT药物中G-Rg1，G-Re含量较高，但是它们在给药后大鼠血浆内的浓度非常低，均在10 μg·L-1以下。血浆中二醇型人参皂苷（G-Rb1，G-Rb2/Rb3，G-Rc，G-Rd） 的血药浓度均高于三醇型人参皂苷（G-Rg1，G-Re）。这和Liu等[9]在三七皂苷中发现的特征相似，理由可能是由于三醇型皂苷极性更强，不利于透过小肠上皮吸收所致。二醇型人参皂苷类的消除半衰期都较长，因此虽然单次给药后，人参皂苷类成分的血药浓度并不高，但是在连续给药方式下，会累计达到较高稳态血药浓度，从而产生相应的药效。在SLT给药后脑组织分布的分析结果可以看出，人参皂苷成分能很快进入脑组织，但是除G-Rg1外，均只在15 min，2 h 2个时间点检出，且浓度下降较快，和血浆中表现的长半衰期不一致。而且浓度顺序也显示和血药浓度不一致的结果，G-Rg1，G-Re在脑组织中有较高浓度，并且都高于同时间点的血药浓度。
实验结果提示服用SLT后，人参皂苷成分能够快速吸收入血，并进入脑组织。人参皂塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布论文资料由论文网www.udooo.com提供,转载请保留地址.苷可以通过进入脑组织直接作用于神经细胞发挥作用，尤其是G-Rg1，G-Re可能是发挥快速、直接对脑组织作用的主要成分。同时，以二醇型为主的人参皂苷在血浆中长时间滞留，它们可能是通过对外周的药理作用[10]保护脑组织的主要人参皂苷成分。
[参考文献]
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[2]徐立， 宋文婷， 林成仁， 等. 塞络通胶囊对大鼠多发性脑梗死恢复期Glu和GABA合成以及NMDA受体亚型表达的影响 [J]. 药学学报， 2012， 47（7）： 870.
[3]徐立， 丛伟红， 魏翠娥， 等. 维脑康对小鼠记忆障碍的影响[J]. 中药药理与临床， 2007， 23（6）： 60.
[4]Song X Y， Hu J F， Chu S F， et al. Ginsenoside Rg1 attenuates okadaic acid induced spatial memory impairment by the GSK3 beta/tau signaling pathway and the beta formation prevention in rats [J]. Eur J Pharmacol， 2013， 710（1/3）： 29.
[5]Ye R， Zhao G， Liu X. Ginsenoside Rd for acute ischemic stroke： translating from bench to bedside [J]. Expert Rev Neurother， 2013， 13（6）： 603.
[6]李明强， 曾照芳， 尤萍. 人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注神经损伤后的修复作用[J]. 生物信息学， 2011， 9（2）： 155.
[7]林力， 刘建勋， 张颖， 等. LC-MS/MS法同时测定犬血浆中7种人参皂苷类成分及其在人参提取物药代动力学研究中的应用 [J]. 世界科学技术——中医药现代化， 2012， 14（3）： 1572.
[8]Zhou D， Tong L， Wan M， et al. An LC-MS method for simultaneous determination of nine ginsenosides in rat plaa and its application in pharmacokinetic study [J]. Biomed Chromatogr， 2011， 25（6）： 720.
[9]Liu H， Yang J， Du F， et al. Absorption and disposition of ginsenosides after oral administration ofPanax notoginseng extract to rats[J]. Drug Metab Dispos， 2009， 37（12）： 2290.
[10]Kang A， Hao H， Zheng X， et al. Peripheral anti-inflammatory effects explain the ginsenosides paradox between poor brain distribution and anti-depression efficacy[J]. J Neuroinflam， 2011， 8： 100.
Pharmacokinetics and brain distribution of ginsenosides
after administration of Sailuotong
ZHANG Ying， LIN Li， LIU Guang-yu， LIU Jian-xun* ， LI Tao
（Research Center， Xiyuan Hospital， China Academy of Chinese Medical Science， Beijing 100091， China）
[Abstract]Sailuotong （SLT） is a compound preparation composed of ginseng， ginkgo and saffron for the treatment of vascular dementia. In order to identify its material foundation and provide evidence for therapeutic regimen， the pharmacokinetics and brain distribution of ginsenosides were investigated after intragastric administration of SLT. An LC-MS/MS method was developed for the determination of 7 ginsenosides in rat plaa simultaneously. Statistical analysis of obtained data demonstrated that the method has achieved the desired linearity， precision， accuracy and sensitivity. After administration of SLT at 60 mg·kg-1 dose， 7 ginsengosides were all absorbed into systematic circulation. The quantitative and statistical analysis of gensenosides in plaa showed that protopanaxdiol saponins exhibited higher concentration and longer half life than protopanaxatriol saponins. The mean value of half life of ginsenosides Rg1， Re， Rb1， Rb2/b3， Rc and Rd were 15.26， 2.46， 18.41， 27.70， 21.86 and 61.58 h respectively. The peak concentration of them were 7.15， 2.83， 55.32， 30.22， 21.42，8.81 μg·L-1 respectively. The determination of brain distribution at different time after dosing revealed ginsenosides entered into brain promptly but the concentration declined along with time rapidly. The ginsenosides with higher concentration in brain were Rg1， Re， Rb1 and Rc. These findings demonstrated ginsenosides could be absorbed in blood and penetrated into brainrapidly. Some ginsenosides， especially Rg1 and Re， might be the main components directly effecting neurocyte in brain taking advantage of their better brain distribution. While ginsenosides of mostly protopanaxdiol saponins might protect brain mainly depending on peripheral efficacy in virtue of their long residence in blood， by which higher concentration could be reached after multiple dosing.
[Key words]Sailuotong； gensenosides； LC-MS/MS； pharmacokinetics； brain distribution
doi：10.4268/cjcmm20140230
[责任编辑陈玲]
[关键词]塞络通；人参皂苷；LC-MS/MS；药代动力学；脑分布
[收稿日期]2013-08-26
[基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项（2012ZX09101214）；北京市科技计划项目（Z121102001112006）；国家自然科学基金项目（81072929）
[通信作者]*刘建勋，研究员，中药药理方向，Tel：（010）62874049， E-mail：jianxun_liu@16
3.com
[作者简介]张颖，副研究员，研究方向为药代动力学，Tel：（010）62835641， E-mail：zhyingde@sina.com塞络通（简称SLT）是根据临床治疗缺血性脑血管病常用药物人参、银杏叶、西红花的疗效及经验，结合现代药理学研究结果研制开发的新型现代中药产品。具有益气活血、化瘀通络、健脑益智的功效，主治血管性痴呆、缺血性中风恢复期等疾病。 药理研究表明该药可保护脑组织，抑制炎症反应，改善络脉瘀阻证候的相关性转变[1]，升高脑内与学习记忆相关神经递质水平[2]，延迟痴呆病程发展，对缺血性中风及其引起的血管性痴呆有预防和治疗作用。实验中发现该药在血管性痴呆动物模型上较对照药达纳康、哈伯因表现出更强的升高中枢相关神经递质含量、改善空间学习记忆、抗氧化等作用[3]。人参是该复方中的君药，其主要成分为人参皂苷。近代药理研究表明人参皂苷成分具有多种脑保护作用。例如人参皂苷Rg1（G-Rg1）能够减轻老年痴呆模型大鼠的记忆损伤[4]；人身皂苷Rb1和Rd都具对脑缺血损伤的神经保护作[5-6]。为探讨SLT药效物质基础，并为给药方案提供依据，本实验对治疗剂量塞络通给予大鼠后人参皂苷成分在体内的血药浓度、药代特征、以及在脑组织分布进行了研究。
1材料
1.1实验仪器
液相质谱联用仪（API 4000QTRAP），配有Turbo VTM离子源仓，离子喷雾和大气压电离离子源，以及Analysis 1.4.2数据处理系统，美国Applied Biosystem公司产品；高效液相系统为Agilent 1200系统。配置包括G1322A 脫气机，G1311A四元梯度泵，G1329A自动进样器G1316A柱温箱，G1330B进样盘温控器，G1314B检测器，美国Agilent公司产品。台式高速冷冻离心机（ MIKRO 22R），德国Hettich公司产品。氮吹仪（Model 18780），美国PIERCE公司产品。1.2药品与试剂
G-Re对照品（批号110754-200421），G-Rg1（批号110703-200424），G-Rb1（批号110704-200420），G-Rb3（批号111686-200501）均为供含量测定用对照品，购自中国食品药品检定研究院。G-Rb2，Rc，Rd，Rf对照品购自南京青泽医药公司，纯度大于98%。塞络通制剂由中国中医科学院西苑医院药学室提供，批号060925，其中含人参总皂苷提取物45.5%，G-Rg1，Re，Rb1，Rb2/b3，Rc，Rd，Rf在总皂苷提取物中的含量分别为13.8%，4.62%，11%，2.11%，6.37%，1.17%，3.4%。流动相用色乙腈、甲醇均为色谱纯，购自美国Fisher公司产品。流动相用甲酸为美国J.T.Baker公司色谱纯产品。1.3动物
实验用大鼠为雄性Wistar大鼠，购自中国医学科学院实验动物研究所，合格证号SCXK（京） 2005-0013。2策略与结果
2.1对照品溶液的配制
分别精密称量人参皂苷Rg1，Re，Rb1，Rd对照品2.00 mg，以甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，配制成质量浓度为200 mg·L-1的储备液；分别精密称量人参皂苷Rc，Rb2，Rb3对照品1.00 mg，以甲醇溶解并定容至2 mL量瓶中，配制成质量浓度为500 mg·L-1储备液。以上储备液均放置于4 ℃冰箱储存待用。2.2血浆样品前处理
37 ℃水浴解冻样品后，精密吸取血浆200 μL，加入200 μL醋酸缓冲液（0.2 mol·L-1 pH 4.6）和400 μL的丙酮，涡流混合1 min，避光静置10 min，离心（15 000 塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布相关论文由www.udooo.com收集r·min-1）10 min，分离上清液800 μL于50 ℃氮气流下吹干，残留物用1 mL的混合萃取液（乙酸乙酯与正丁醇的1∶1混合液，用水饱和）溶解，涡流混合1 min，15 000 r·min-1离心10 min，取上清液800 μL于50 ℃氮气流下吹干，加入100 μL的50%的甲醇液复溶，再次涡流混合1 min，15 000 r·min-1离心10 min，取上清液进行LC-MS/MS分析。2.3脑组织样品前处理
按照本实验室已建立的文献中血浆处理策略[7]，37 ℃水浴解冻样品后，精密吸取脑组织匀浆100 μL，加入1 000 μL混合萃取剂（乙酸乙酯与正丁醇的1∶1混合液，用水饱和），涡流混合1 min，15 000 r·min-1离心10 min，取上清液800 μL于50 ℃氮气流下吹干，加入100 μL的流动相复溶，取上清液进行LC-MS/MS分析。2.4血浆样品中人参皂苷成分的分析
液相条件：Agilent ZORBAX SB-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），美国Agilient公司产品； Zorbarx SB-C18保护柱 （4.6 mm×12.5 mm，5 μm），美国Agilient公司产品； 流动相，A相，水-甲醇 198∶2，含有1 mmol·L-1乙酸铵；B相，甲醇，含有1 mmol·L-1乙酸铵。按照以下梯度洗脱的流动相比例变化：0～7 min，67% B～98% B，流速600 μL·min-1；7～9.5 min，98% B，流速600 μL·min-1；9.51～15 min，67% B，流速700 μL·min-1。柱温保持在30 ℃。质谱条件：离子源为ESI源。气帘气体为103.425 kPa。源内温度 600 ℃。源内气体GS1：413.7 kPa。源内气体GS2：60 413.7 kPa。离子喷射电压（IS）：5 000 V。碰撞气（CAD）： High。检测方式：正离子检测。扫描方式：多反应监测（MRM）方式，用于定量分析的离子及其质谱参数，见表1。
表1人参皂苷成分定量离子及质谱参数
Table 1Ion transitions and mass spectrum parameters for the quantitation of ginsenosides
2.5脑组织样品中人参皂苷成分的分析
按照文献中描述本实验室已建立生物样品分析策略检测的脑组织样品中的人参皂苷成分[7]。2.6塞络通药代动力学试验样品采集
健康雄性Wistar大鼠6只，体重（220±20） g，实验前12 h禁食不禁水，实验期间自由饮水，实验2 h后进食。按60 mg·kg-1的剂量灌胃给药（给药体积为10 mL·kg-1），分别于给药后0.083，0.167，0.333，0.667，1，1.5，2，4塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布相关范文由写论文的好帮手www.udooo.com提供,转载请保留.，6，8，10，12，24，36，48，60，72 h经大鼠眼眶静脉丛采血约0.4 mL，置肝素化离心管中，离心，吸取上层血浆，-30 ℃保存待测。2.7塞络通组织分布试验样品采集
健康雄性Wistar大鼠24只，体重（220.0±15.0） g。随机分成4个时间组，试验前禁食12 h，给药2 h后自由进食与饮水。以塞络通 60 mg·kg-1的剂量灌胃给药，4个时间组的受试大鼠分别在给药后0.25，2，7，24 h取血后处死，立即解剖采集脑组织。用生理盐水冲净脑组织上残留血液后，用滤纸吸干水分，称重后，以1∶3（g∶mL）体积加入生理盐水，冰浴下高速匀浆。样品于-30 ℃保存待测。2.8血浆分析策略学的确证
2.8.1专属性取大鼠空白血浆，按“血浆样品前处理”项下策略操作，获得大鼠空白血浆样品的色谱图；将人参皂苷Rg1，Re，Rb1，Rb2/b3，Rc，Rd对照品系列溶液加入大鼠空白血浆中，依同法进行样品处理，获得相应的标准样品色谱图；大鼠灌胃塞络通后的血浆样品，依同法操作，获得实测样品色谱图。结果表明在该处理策略下大鼠血浆及脑组织中内源性物质均不干扰人参皂苷的测定，实测样本和标准样本色谱行为一致。待测物G-Rb1，Rb2/Rb3，Rc，Rd，Re，Rg1的保留时间分别为7.77，8.30，7.83，9.01，3.68，91 min。
2.8.2标准曲线及线性范围制作标准曲线当天取对照品储备液用50%甲醇逐级稀释成系列标准溶液。取空白大鼠血浆900 μL，加人参皂苷类成分系列标准溶液100 μL，配制成相当于系列标准血浆样品，精密吸取200 μL按“样品处理”项下依法操作，进样20 μL，进行LC-MS/MS分析；以待测物浓度为横坐标，待测物峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线。各成分在血浆中的典型标准曲线为：G-Rg1，y=1.32×104x+9.91×103，r=0.987，线性范围0.16～100 μg·L-1；G-Re，y=1.97×104x+3.41×103，r=0.990，线性范围0.16～20 μg·L-1；G-Rb1，y=1.06×103x+1.48×103，r=0.998，线性范围0.8～500 μg·L-1；G-Rd，y=2.05×103x+487，r=0.995，线性范围0.8～500 μg·L-1；G-Rb2，y=1.16×103x+497，r=0.995，线性范围0.8～500 μg·L-1；G-Rc，y=1.11×103x+319，r=0.995，线性范围0.8～500 μg·L-1。2.8.3回收率在标准曲线范围内选择低、中和高3种浓度，以空白血浆配制各人参皂苷3个浓度的QC样品，每个浓度点5份样品，同时配制相同浓度以检测流动相为基质的标准溶液。将相同浓度的样品在同1 d按照样品处理策略与处理后分析，每份样品进样1次。同时将未经预处理的同浓度标准溶液以同样策略分析。以QC样品峰面积和标准溶液峰面积相比计算回收率，3种浓度下的大鼠血浆中各人参皂苷成分的回收率基本一致，平均值分别为62.9% （G-Rg1），58.4%（G-Re），20.8% （G-Rb1），38.5% （G-Rb2），17.0%（G-Rc），30.4%（G-Rd）。2.8.4精密度和准确度按“血浆样品处理”项下操作，应用大鼠空白血浆，配制各人参皂苷新型范围内低、中、高3个浓度的质量制约（QC）样品，每个浓度5份，并根据标准曲线计算QC样品的测得浓度，与配制浓度对照，求得测定策略的准确度与精密度。考察结果显示测定策略的准确度在92.5%～11
3.5%，精密度（RSD）在2.7%～12%。
2.9塞络通给药后人参皂苷成分的血药浓度及药代动力学
大鼠灌胃给塞络通60 mg·kg-1，7种目标成分均在血浆中检出，其平均血药浓度-时间曲线见图 1。采用DAS2.0生物统计学软件对大鼠灌胃给药后7种人皂苷的血药浓度进行非房室模型（统计距法）计算主要药代动力学参数列于表 2。各成分曲线下面积AUC0-t从大到小顺序依次为G-Rb1，G-Rb2/Rb3，G-Rc，G-Rd，G-Rg1，G-Re。G-Rd的消除半衰期t1/2最长，达到61.6 h，而G-Re的半衰期只有不到3 h，其他成分的半衰期也较长，在15～28 h。2.10塞络通给药后人参皂苷成分的脑组织分布
由于人参皂苷成分在脑组织中的分布含量较血药浓度更低，对脑组织中人参皂苷成分的含量测定策略做了进一步优化，采用更灵敏的LC-MS/MS策略检测脑组织中8种人参皂苷成分[7]。空白脑组织对8种成分的检测没有干扰。各成分在脑组织匀浆中的标曲和线性范围为：G-Rg1，y=1.05×104x + 784（r=0.993，线性范围0.1～25 μg·L-1）；G-Re，y=5.86×103x + 5.5（r=0.992，线性范围0.1～25 μg·L-1）；G-Rb1，y=1.1×104x + 1.29×103（r=0.998，线性范围0.1～25 μg·L-1）；G-Rf，y=1.11×104x + 141（r=0.994，线性范围0.1～25 μg·L-1）；G-Rb2/b3，y=6.96×103x + 677（r=0.999，线性范围0.1～25 μg·L-1）；G-Rc， y=2.35×103x + 271（r=0.979，线性范围0.1～25 μg·L-1）；G-Rd，y=3.06×103x + 151（r=0.996，线性范围0.1～25 μg·L-1）。大鼠灌胃给予塞络通60 mg·kg-1后，测得各人参皂苷成分在脑组织中的含量随时间变化见图2所示。可以看到所有待测人参皂苷成分均能够进入在脑组织，但是随时间下降很快，到7 h时只有G-Rg1有微量检出外，其他人参皂苷均未能检出。8种人参皂苷中G-Rg1，Re，Rb1，Rc和是含量较高的成分。
A.G-Rg1； B.G-Re ；C.G-Rb1； D.G-Rb2/Rb3； E.G-Rc； F.G-Rd。
图1大鼠灌胃给与SLT 60 mg·kg-1后，各人参皂苷成分血药浓度-时间图（n=6）
Fig.1Plaa concentration-time curves of ginsenosides after administration of SLT at dose of 60 mg·kg-1（n=6）
表2大鼠灌胃给与SLT 60 mg·kg-1后，各人参皂苷成分药代动力学参数 （n=6）
Table 2pharmacokinetic parameters of ginsenosides after administration of SLT at dose of 60 mg·kg-1 （n=6）
3讨论
已有文献研究表明人参皂苷成分的生物利用度低，因此对这类成分的检测需要建立高灵敏度的分析策略。近年来基本采用液质联用策略实现对这类成分的体内分析。通过比较目标人参皂苷在正、负离子源中的质谱裂解行为，选择了信号更为稳定的ESI+源。此外，实验中发现这些目标人参皂苷的一级离子中加钠离子的信号远强于加氢离子，并且离子信号很稳定。为获得更高灵敏度，测定时选择各人参皂苷M+Na→碎片离子作为定量离子对。所分析人参皂苷成分中，G-Rb2和G-Rb3是立体差向异构体，普通的反相分析柱上无法分离，因此在该位置出现的峰应是两者之和。此外，G-Rc和G-Rb2/b3也是同分异构体，在色谱柱上的保留行为相似，经过对流动相和分析柱优化比较，最终采用较长的分析柱和缓梯度实现峰位的良好分离。经策略学确证，证明该分析策略的准确度、精密度及线性等均符合药代动力学定量要求，且灵敏度较Zhou等[8]建立的多皂苷分析策略更为灵敏，能满足在较低口服给药剂量下，对大鼠血浆中多种人参皂苷成分的分析要求。
图2大鼠灌胃给与SLT 60 mg·kg-1后，在不同时间点各人参皂苷成分在脑组织中的含量（n=6）
Fig.2Brain distribution of ginsenosides at different time points af塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布由专注毕业论文与职称论文的www.udooo.com提供,转载请保留.ter administration of SLT at dose of 60 mg·kg-1 （n=6）
塞络通灌胃给与大鼠后，7种人参皂苷均能进入血循环，并且显示出血药浓度和皂苷的结构类型相关性很强的特征。尽管在SLT药物中G-Rg1，G-Re含量较高，但是它们在给药后大鼠血浆内的浓度非常低，均在10 μg·L-1以下。血浆中二醇型人参皂苷（G-Rb1，G-Rb2/Rb3，G-Rc，G-Rd） 的血药浓度均高于三醇型人参皂苷（G-Rg1，G-Re）。这和Liu等[9]在三七皂苷中发现的特征相似，理由可能是由于三醇型皂苷极性更强，不利于透过小肠上皮吸收所致。二醇型人参皂苷类的消除半衰期都较长，因此虽然单次给药后，人参皂苷类成分的血药浓度并不高，但是在连续给药方式下，会累计达到较高稳态血药浓度，从而产生相应的药效。在SLT给药后脑组织分布的分析结果可以看出，人参皂苷成分能很快进入脑组织，但是除G-Rg1外，均只在15 min，2 h 2个时间点检出，且浓度下降较快，和血浆中表现的长半衰期不一致。而且浓度顺序也显示和血药浓度不一致的结果，G-Rg1，G-Re在脑组织中有较高浓度，并且都高于同时间点的血药浓度。
实验结果提示服用SLT后，人参皂苷成分能够快速吸收入血，并进入脑组织。人参皂塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布论文资料由论文网www.udooo.com提供,转载请保留地址.苷可以通过进入脑组织直接作用于神经细胞发挥作用，尤其是G-Rg1，G-Re可能是发挥快速、直接对脑组织作用的主要成分。同时，以二醇型为主的人参皂苷在血浆中长时间滞留，它们可能是通过对外周的药理作用[10]保护脑组织的主要人参皂苷成分。
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Pharmacokinetics and brain distribution of ginsenosides
after administration of Sailuotong
ZHANG Ying， LIN Li， LIU Guang-yu， LIU Jian-xun* ， LI Tao
（Research Center， Xiyuan Hospital， China Academy of Chinese Medical Science， Beijing 100091， China）
[Abstract]Sailuotong （SLT） is a compound preparation composed of ginseng， ginkgo and saffron for the treatment of vascular dementia. In order to identify its material foundation and provide evidence for therapeutic regimen， the pharmacokinetics and brain distribution of ginsenosides were investigated after intragastric administration of SLT. An LC-MS/MS method was developed for the determination of 7 ginsenosides in rat plaa simultaneously. Statistical analysis of obtained data demonstrated that the method has achieved the desired linearity， precision， accuracy and sensitivity. After administration of SLT at 60 mg·kg-1 dose， 7 ginsengosides were all absorbed into systematic circulation. The quantitative and statistical analysis of gensenosides in plaa showed that protopanaxdiol saponins exhibited higher concentration and longer half life than protopanaxatriol saponins. The mean value of half life of ginsenosides Rg1， Re， Rb1， Rb2/b3， Rc and Rd were 15.26， 2.46， 18.41， 27.70， 21.86 and 61.58 h respectively. The peak concentration of them were 7.15， 2.83， 55.32， 30.22， 21.42，8.81 μg·L-1 respectively. The determination of brain distribution at different time after dosing revealed ginsenosides entered into brain promptly but the concentration declined along with time rapidly. The ginsenosides with higher concentration in brain were Rg1， Re， Rb1 and Rc. These findings demonstrated ginsenosides could be absorbed in blood and penetrated into brainrapidly. Some ginsenosides， especially Rg1 and Re， might be the main components directly effecting neurocyte in brain taking advantage of their better brain distribution. While ginsenosides of mostly protopanaxdiol saponins might protect brain mainly depending on peripheral efficacy in virtue of their long residence in blood， by which higher concentration could be reached after multiple dosing.
[Key words]Sailuotong； gensenosides； LC-MS/MS； pharmacokinetics； brain distribution
doi：10.4268/cjcmm20140230
[责任编辑陈玲]