本站原创
摘要：特发性肺纤维化是一种慢性致命性、以肺部组织异常重塑为特点的间质性肺部疾病。其病因不明，目前认为是环境因素与多种遗传因素相互作用可能参与其疾病的进展。基质金属蛋白酶-1其主要作用是降解细胞外基质成份，认为其在肺纤维化的形成中起了重要作用。近年来探讨显示MMP-1具有基因多态性现象，其与哮喘、慢性阻塞型肺疾病、肺结核等多种肺疾病之间的易感性已有报道。而国内尚无关于MMP-1基因多态性与特发性肺纤维化的探讨报道。本实验旨在通过探讨基质金属蛋白酶-1（Matrix metalloproteinase-1）启动子区-1607位点1G/2G单核苷酸基因多态性(single nucleotide polymorphi，SNP）与中国河北地区汉族特发性肺纤维化的相关性，并探测特发性肺纤维化患者血清学MMP-1和TIMP-1的蛋白含量，探讨中国河北地区汉族特发性肺纤维化患者的遗传易感因素、发病机制及该位点基因多态性在不同种族特发性肺纤维化患者易感性方面的差别。策略：采取基于人群的病例-对照探讨策略，参考2002年中华医学会颁布的《特发性肺纤维化诊断和治疗指南（草案）》中的诊断标准，选取临床上诊断为特发性肺纤维化（IPF）汉族患者84例，其中男性51例，女性33例，年龄43岁-88岁，平均（66.7±9.5）岁，且除外继发性肺纤维化、急性感染、肿瘤、栓塞、心衰、制约不良的糖尿病、消化性溃疡、严重骨质疏松、结核病患者。对照组：选取汉族健康体检人群100例，其中男性53例，女性47例，年龄40岁-73岁，平均年龄（50.2±7.5）岁，且既往无变态反应性疾病病史，近期无感染，无免疫抑制剂运用史。采集IPF患者及健康对照组外周静脉血5ml，其中2mlEDTA抗凝，以消化-苯酚-氯仿有机溶剂法和树脂型TM基因组DNA提纯试剂盒提取外周血白细胞DNA，利用限制性内切酶ALUI，聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP）技术结合琼脂糖凝胶电泳的策略，检测IPF患者和健康对照者MMP-1基因启动子区-1607(1G/2G)多态性位点的基因型和等位基因分布，浅析两组人群MMP-l基因型和等位基因频率的差别。余3ml静脉血促凝剂促凝，采取双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定IPF患者和健康对照组MMP-1和TIMP-1的血清蛋白表达水平。结果：1MMP-1位点基因多态性浅析1.1MMP-1-1607的基因型本实验检测得到三种基因型：1G/1G型、1G/2G型及2G/2G型；其中1G/1G型为野生型，1G/2G型及2G/2G型为突变型。IPF组与健康对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡性检验（P0.05），两组之间具有良好的可比性。1.2MMP-1-16071G/2G各基因型在两组间的分布情况IPF组84例中检测出1G/1G基因型12例(14.3%)，1G/2G基因型30例(35.7%)，2G/2G基因型42例(50%)。健康对照组100例中检测出1G/1G基因型11例(11%)，1G/2G基因型42例(42%)，2G/2G基因型47例(47%)。MMP-1-1607位点各基因型在两组间的分布频率比较无显著统计学差别（χ2=0.940, P0.05）。1.3MMP-1-1607位点1G/2G各等位基因频率在两组间的分布情况IPF组84例中1G等位基因频率为32.1%，2G等位基因频率为67.9%，健康对照组100例中1G等位基因频率为32%，2G等位基因频率为68%。MMP-1-1607位点的各等位基因在两组间的分布频率比较无显著统计学差别性（χ2=0.001, P0.05）。2血清MMP-1，TIMP-1蛋白浓度的变化2.1血清MMP-1蛋白浓度变化：IPF患者与健康对照组MMP-1血清蛋白浓度分别为：374.66±54.18ng/ml，97.45±20.39ng/ml。IPF患者血清MMP-1蛋白浓度显著高于健康对照组，两组比较有统计学作用（P0.05）。2.2血清TIMP-1蛋白浓度变化：IPF组与健康对照组TIMP-1血清蛋白浓度分别为：111.10±26.70ng/ml，40.75±11.46ng/ml。IPF患者血清TIMP-1蛋白浓度较健康对照组显著升高，两组比较有统计学作用(P0.05)。2.3用MMP-1/TIMP-1蛋白浓度得出两者的比值IPF组与健康对照组MMP-1/TIMP-1比值分别为：3.39±1.06，2.72±1.00，两组比较有统计学作用（P0.05）。结论：1．结合本探讨推测MMP-1-1607位点的1G/2G基因多态性与中国河北地区汉族人群特发性肺间质纤维化的易感性无显著相关性，结合对其它地区、种族人群的探讨，说明该位点基因多态性与IPF的易感性有着种族、地区的差别。2. IPF患者肺纤维化的发生与MMP-1,TIMP-1水平升高可能有关，MMP-1和TIMP-1可能参与IPF疾病的发生进展。关键词：特发性肺纤维化论文基质金属蛋白酶-1论文单核苷酸基因多态性论文限制性片段长度多态性论文聚合酶链反应论文
摘要4-7
ABSTRACT7-11
前言11-13
材料及策略13-22
结果22-24
附图24-26
附表26-28
讨论28-33
结论33