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摘要：γ-氨基丁酸是中枢神经系统中的主要抑制性神经递质，其不仅有着于哺乳动物的中枢神经系统当中，也分布于中枢神经系统以外的多种组织中。GABA受体包括离子通道型和代谢型两种，其中GABAA和GABAC受体为离子通道型，而GABA_B受体为代谢型，属G蛋白偶联受体（G-protein coupled receptor，GPCR)家族。作为神经递质受体的GABA_B受体可以调节多种肿瘤细胞的增殖和迁移，但机制不明。PI3K/Akt信号通路在肿瘤发生中起着重要作用，PI3K（磷脂酰肌醇-3激酶）是细胞内的一种重要激酶，根据其结构和功能的不同，分为三大类：Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类。根据其激活方式的不同，Ⅰ类PI3K被进一步分为IA类和IB类。IA类PI3Ks由催化亚基（p110α,p110β或p110δ）和调节亚基（p85α/p55α/p50α, p85β或p55γ）组成，其中p110α和p110δ由受体酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase, RTK）所激活，而p110β可被RTK或GPCR激活；IB类PI3Ks由催化亚基（p110γ）和调节亚基（p101或p84）组成，由GPCR所激活。除了通过p110β和p110γ激活Akt外，GPCR也可通过转激活RTK而激活Akt。PI3K/Akt信号通路可推动细胞生长、增殖与存活，在肿瘤细胞中呈异常激活状态，但目前尚未见到肿瘤细胞中GABA_B受体调控PI3K/Akt信号通路的报道。本论文以人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231为探讨对象，探讨了GABA_B受体对PI3K/Akt信号通路的影响。用GABA_B受体的特异性别构调节剂CGP7930短时间处理人乳腺癌细胞（MCF-7和MDA-MB-231），发现GABA_B受体能够瞬时激活Akt，且30min时Akt磷酸化达到最高水平,随后逐渐下降。为探讨GABA_B受体是否通过转激活RTK及其下游的p110α而激活Akt，本人建立了稳定表达p110α的细胞系。用CGP7930短时间处理高表达p110α、p110α沉默或正常表达p110α的乳腺癌细胞，发现随着p110α表达水平的增高，Akt的磷酸化水平也逐渐升高，提示GABA_B受体可能通过转激活RTK而激活p110α，以而增强Akt的磷酸化水平；用GABA_B受体的激动剂Baclofen和别构调节剂CGP7930处理两种乳腺癌细胞，MTT法实验结果表明，Baclofen对于MCF-7细胞的增殖无显著抑制作用，但可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖；Transwell实验结果表明，Baclofen可增强MDA-MB-231细胞的迁移，CGP7930则抑制细胞迁移，并呈浓度相关性。目前，尚未见到GABA_B受体激活对乳腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路、细胞增殖、迁移等影响的相关报道，由此，本探讨为进一步探讨GABA_B受体通过偶联p110α激活Akt的分子机制提供了新的实验依据，同时，也为针对GABA_BR-p110偶联的抗肿瘤新药的筛选提供新的论述依据。关键词：GABA_B受体论文人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231论文PI3K论文Akt论文p110α论文
摘要4-6
Abstract6-10
1 绪论10-19
1.1 GABA_B受体的结构和功能10-13
1.2 GABA_B受体与肿瘤发生的相关性13-14
1.3 PI3K/T 信号通路14-16
1.4 GPCR 介导的 PI3K/T 信号通路的激活16-17
1.5 本课题的探讨目标，内容和作用17-19
2 实验技术原理19-26
2.1 乳腺癌细胞的培养：细胞传代、保种、复苏19
2.2 小鼠小脑颗粒神经元细胞的原代培养19
2.3 SDS-PAGE 电泳19-20
2.4 免疫印迹20-21
2.5 RT-PCR21-22
2.6 脂质体转染22
2.7 siRNA22-23
2.8 稳定表达 P110α细胞系的建立23-24
2.9 MTT 法24
2.10 TRANSWELL 检测细胞迁移24-26
3 材料与策略26-41
3.1 实验材料26-27
3.2 实验策略27-41
4 实验结果与讨论41-52
4.1 实验结果41-49
4.2 讨论与展望49-52
致谢52-53