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摘要：目的：了解本地产超广谱β—内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases, ESBLs)大肠埃希菌(Escherichia cop)的耐药情况,探讨转座子与整合子遗传标志在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的作用。策略：1.初步筛选试验(Screening test):选用头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南、头孢曲松药敏纸片对71株大肠埃希菌进行产ESBLs筛选试验,凡头孢他啶的抑菌环直径≤22 mm,头孢曲松≤25 mm,氨曲南或头孢噻肟≤27 mm,则提示为可疑产ESBLs菌株。2.纸片确认试验(Confirmatory tests):将初筛可疑产ESBLs菌株同时用头孢他啶和头孢他啶加克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟加克拉维酸作药敏试验,对任何一组药物,加克拉维酸前后抑菌环直径相差≥5mm可确认为产ESBLs菌株。3.药敏试验：纸片扩散法(Kerby-Bauer法,K-B法),采取NCCLS推荐的策略测定71株大肠埃希菌对三类6种常用抗菌药物—链霉素(S)、阿米卡星(A)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV)、头孢噻肟(CTX)、头孢西丁(FOX)的耐药性。采取大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922进行质控。4.PCR技术：采取Biospin细菌基因组DNA试剂盒提取大肠埃希菌DNA。根据qacE△1-sul1基因(Ⅰ类整合子遗传标记)、merA(为转座子Tn21和Tn501共同的遗传标记)、tnpA(为转座子Tn1、Tn2、Tn3和Tn1000共同的遗传标志)、tnpU(为转座子Tn1548遗传标)设计四对引物,以提取的大肠埃希菌DNA为反应模板进行PCR扩增。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果及送检做基因测序。结果：1.产ESBLs菌株的检测结果：临床分离的71株大肠埃希菌表型筛选试验初步筛出可疑产ESBLs 55株(77.46%),进一步确认试验共检出产ESBLs35株(49.30%)。2.临床分离株对6种抗生素耐药分布：(1)耐S 41株、耐A 6株、耐LEV 45株、耐CIP 51株、耐CTX 44株、耐FOX 9株；(2)耐药方式分布：多耐方式45株(63.38%)、双耐8株(11.27%)、单耐11株(15.49%)、全敏感菌株7株(9.86%)。3.转座子的检出：PCR法检出遗传标记merA阳性菌共15株(21.13%),而转座子tnpA和tnpU均未检出。不同耐药方式中转座子遗传标记merA检出率的比较有统计学差别(P0.05)。产ESBLs酶菌株中不同耐药方式中转座子遗传标记merA检出率的比较有统计学差别(P0.05)；非产ESBLs酶菌株中不同耐药方式中转座子遗传标记merA检出率的比较无统计学差别(P0.05)。4.整合子遗传标记(qacE△1-sul1)的检出：PCR法共检出55株(77.46%),其中多耐方式菌株检出率最高为88.89%(40株),其次为双耐方式75%(6株),单耐方式中检出率最低为22.22%(2株),不同耐药方式中整合子遗传标记检出率有统计学差别(P0.05)。产ESBLs酶菌株中不同耐药方式的整合子遗传标记检出率有统计学差别(P0.05)；非产ESBLs酶菌株不同耐药方式中整合子遗传标记检出率无统计学差别(P0.05)。5.转座子阳性株中整合子检出情况：共检出10株(66.67%),其中多耐方式中两者重叠率最高为80%(8株)、双耐20%(2株)。6.转座子遗传标记merA在产ESBLs酶且整合子阳性菌株中的检出：共检出6株,其中多耐方式4株,双耐2株,单耐未检出。不同耐药方式中检出率有统计学差别(P0.05)。结论：1.本地区大肠埃希菌耐药情况严重,产ESBLs酶菌株常见,并以多耐方式菌株为主；2.转座子、整合子的分布以耐多药方式菌株为主；3.同时携带整合子和转座子基因的菌株多体现为耐药,尤其在耐多药方式中更为显著；4.产ESBLs酶且同时携带转座子、整合子基因的菌株主要分布在耐多药方式菌株中,该三者在多重耐药机制中可能有着一定的联系。关键词：大肠埃希菌论文多重耐药论文整合子论文转座子论文
摘要3-6
Abstract6-9
前言9-11
材料与策略11-18
结果18-30
讨论30-37
结论37-38