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摘要：目的：1、建立心肌细胞的培养策略，探讨贯叶金丝桃苷（Hypericumperforatum glycosides,Hyp）对心肌细胞的毒性作用，以确定Hyp的给药浓度范围。2、探讨Hyp对过氧化氢（H_2O_2）所致乳鼠心肌细胞损伤的生化指标及相关基因表达的影响，以确定其抗心肌氧化应激损伤的作用机制。策略：1、体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞，通过形态学观察、搏动自律性及免疫组化等策略鉴别心肌细胞。选取搏动良好的细胞，随机分为8个组：正常对照（Control）组、二亚砜溶媒（DMSO）组、Hyp各浓度组（10、5、1、0.2、0.04和0.08g/L），采取四噻唑蓝（MTT）法检测各Hyp给药组对心肌细胞的毒性作用；观察Hyp对心肌细胞的搏动频率的影响。2、体外培养原代SD大鼠乳鼠心肌细胞，实验选取搏动良好的细胞，随机分成7组：正常对照（Normal）组，H_2O_2损伤模型（Model）组，DMSO溶媒组（DMSO），Hyp低剂量（Low）组，Hyp中剂量（Middle）组，Hyp高剂量（High）组，阳性药物（Verapamil）组。除正常对照组外，其余各组均利用H_2O_2诱导损伤建立乳鼠心肌细胞氧化应激损伤模型，MTT法检测氧化应激损伤心肌细胞活力，按试剂盒说明测定氧化应激损伤心肌细胞的LDH、cNOS、iNOS、tNOS、cTnI、CK-MB活性、损伤心肌细胞中Na+-K+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性；RT-PCR法测定Hyp对不同亚型NOSmRNA表达的影响。结果：1、经细胞形态学，心肌细胞搏动情况及免疫组化等鉴别心肌细胞，结果显示纯度高；Hyp对体外培养心肌细胞的TC50=8.946g/L,TC0=0.028g/L，将Hyp以TC0稀释浓度给药对心肌细胞的搏动无影响,小于或等于TC0浓度给药对心肌细胞的毒性很低。2、Hyp低、中、高剂量组的H_2O_2损伤后心肌细胞活力高于H_2O_2损伤模型组(P0.01)；与模型组相比，Hyp中、高剂量组的iNOS、LDH显著下降(P0.01)，cNOS、tNOS的活性显著增高(P0.01)；Hyp中、高剂量组的Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性显著高于模型组(P0.01)；与模型组相比较，Hyp各浓度组均可上调nNOS mRNA表达（P0.01），Hyp高剂量组、Hyp中剂量组对eNOS mRNA、iNOSmRNA、表达均具有显著的上调作用（P0.01），而Hyp低剂量组对eNOSmRNA、iNOSmRNA表达影响与模型组的相比无差别（P0.05）。结论：1、Hyp对体外原代培养的心肌细胞毒性很低。2、Hyp可以抗氧化应激损伤，保护心肌细胞，可能与提升ATP酶活性，选择性阻滞钙内流，抑制钙超载，调节不同亚型NOSmRNA，制约不同亚型NOS蛋白表达有关。关键词：贯叶金丝桃苷论文心肌细胞论文MTT法论文细胞毒性论文过氧化氢论文ATP酶论文一氧化氮合酶论文半定量PCR论文
主要英文缩略词表5-7
中文摘要7-9
ABSTRACT9-12
前言12-15