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摘要：肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属，单链的小RNA肠道病毒，其感染性强且致病率高，对中枢神经系统的侵害尤其严重。近年来，EV71引起社会各界的关注是因为发现该病毒是儿童手足口病(HFMD)的主要病原体之一，特别是导致6岁以下儿童重症手足口病（HFMD）的发生。据统计，目前手足口病90%以上的重症病例是由EV71引起，患儿除了有HFMD的典型症状外，还有高达11．1％和0．6％的感染者患有无菌性脑膜炎、脑炎的中枢神经系统疾病，且病程进展迅速，导致近年来死亡率都高于25/1000。EV71的爆发流行严重危害我国儿童的身体健康，给广大民众带来极大的心理恐慌。现阶段国内外尚未研制出针对EV71的疫苗、特异性治疗药物，对于制约HFMD的发生主要依靠对低幼龄儿童进行宣传教育，建立良好的卫生习惯，由此探讨安全，高效，经济的疫苗迫在眉睫。本探讨以EV71表位肽疫苗探讨为着手点，通过比较29个国内流行株（来自福建，安徽阜阳，江苏，浙江等省份）型基因序列，以及28个NCBI基因库中收录的B型EV71异型毒株的基因序列，发现5个表位在不同血清型的病毒株中能保持很高的同源性。以日本脑炎的D蛋白为载体蛋白与上面陈述的5个表位以T-T-B和T-B-B的方式串联，一共设计构建了8种表位肽组合，并在原核表达系统中进行了高效表达。以原核表达的重组蛋白为抗原进行的免疫性试验，结果显示，上面陈述的8种组合均能在小鼠血清中的产生抗体；其中C，E，F，H四种组合能产生较高水平的抗体，达到本探讨的设计目的，期望可为EV71新型疫苗设计提供论述基础，研制出有运用价值的EV71表位肽疫苗。关键词：手足口病论文肠道病毒71型论文表位肽疫苗论文载体蛋白论文辅助性T细胞表位论文
摘要4-5
ABSTRACT5-7
目录7-8
1 前言8-22
1.1 手足口病8-13
1.1.1 手足口病介绍8-10
1.1.2 手足口病（EV71）分型及我国主要的流行型10-11
1.1.3 手足口病的发病机理及临床体现11-12
1.1.4 手足口病(EV71 病毒)基因组12-13
1.2 手足口病疫苗的探讨近况13-19
1.2.1 传统疫苗13-15
1.2.2 新型疫苗15-19
1.3 实验的策略目的和作用19-22
2 材料与策略22-36
2.1 材料22-28
2.1.1 菌株，载体和小鼠22-23
2.1.2 主要试剂和仪器23-24
2.1.3 缓冲溶液和培养基24-28
2.2 策略28-36
2.2.1 引物的设计及引物和基因片段的合成28-29
2.2.2 原核表达载体的构建29-32
2.2.3 蛋白的表达纯化32-33
2.2.4 蛋白质免疫印迹（Western-blot ）检测33-34
2.2.5 原核表达重组蛋白的免疫原性实验34-36
3 结果浅析36-50
3.1 目的基因的克隆及酶切鉴定36-40
3.1.1 pET 表达载体的构建36-38
3.1.2 pTXB1 系统表达载体的构建38-40
3.2 蛋白的表达和纯化40-43
3.2.1 pET 系统中蛋白的表达和纯化40-41
3.2.2 pTXB1 系统蛋白的表达和纯化41-43
3.3 目的蛋白的检测43
3.4 重组蛋白的免疫原性试验43-50
4 讨论50-58
4.1 新型疫苗和传统疫苗的优缺点50-51
4.2 新型疫苗探讨的进展51-54
4.3 新型表达载体的利用54-55
4.4 其他载体蛋白的选择55-58