摘要3-4
Abstract4-5
目录5-7
第一章 绪论7-17
1.1 引言7
1.2 亲和层析原理7-10
1.2.1 生物亲和层析8
1.2.2 金属离子亲和层析8-9
1.2.3 拟生物亲和层析9
1.2.4 免疫亲和层析9-10
1.3 抗体分离亲和层析10-12
1.3.1 特异抗原和二抗配基10
1.3.2 固定化金属亲和层析10-11
1.3.3 组氨酸配基11
1.3.4 亲硫和疏水性电荷诱导层析11
1.3.5 细菌蛋白类亲和配基11-12
1.4 蛋白 A 探讨进展12-15
1.4.1 理化性质12
1.4.2 结构特点12-13
1.4.3 免疫学特性13-14
1.4.4 运用探讨14-15
1.5 本论文立题作用及探讨内容15-17
第二章 材料与策略17-26
2.1 材料与设备17-18
2.1.1 试剂17
2.1.2 酶和菌株17
2.1.3 实验仪器17-18
2.2 重组菌的构建18-22
2.2.1 引物设计18-19
2.2.2 重组质粒 pMD18-T-z1的构建19-20
2.2.3 重组质粒 pET-28a-z5的构建20-22
2.3 重组蛋白 A 表达与纯化22-23
2.3.1 重组蛋白 A 的表达与验证22
2.3.2 重组蛋白 A 的分离纯化22-23
2.4 重组蛋白 A 亲和层析填料的制备23-24
2.4.1 烯丙基缩水甘油醚活化琼脂糖 4 FF23
2.4.2 琼脂糖 4 FF 的 NHS 基团修饰23
2.4.3 琼脂糖基质偶联重组蛋白 A23
2.4.4 活化和偶联效率的检测23-24
2.5 自制亲和层析填料的性能评价24-26
2.5.1 亲和对象 IgG 的处理24-25
2.5.2 洗脱 pH 考查25
2.5.3 上样量的确定25
2.5.4 上样流速的确定25
2.5.5 耐碱性能考查25-26
第三章 结果与讨论26-50
3.1 重组菌的构建26-35
3.1.1 z 序列的制备26-31
3.1.2 重组质粒 pMD18-T-z5的构建31-33
3.1.3 表达菌 E.cop BL21(DE3)/pET28a-z5的构建与表达33-34
3.1.4 小结34-35
3.2 重组蛋白 A 的亲和纯化35-36
3.2.1 IgG Sepharose 6 FF 纯化重组蛋白 A35-36
3.2.2 小结36
3.3 亲和吸附剂的制备36-39
3.3.1 烯丙基缩水甘油醚的活化37
3.3.2 NHS 的偶联37-39
3.3.3 重组蛋白 A 的偶联39
3.3.4 小结39
3.4 自制重组蛋白 A 亲和层析填料性能评价39-50
3.4.1 自制重组蛋白 A 亲和填料纯化 IgG39-41
3.4.2 不同 pH 洗脱41-44
3.4.3 上样量优化44-45
3.4.4 上样流速45-46
3.4.5 耐碱稳定性46-49
3.4.6 小结49-50
结论与展望50-52
结论50-51
展望51-52
致谢52-53