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摘要：MMS,又名甲磺酸甲酯,是一种典型的化试剂。MMS作为重要的治疗癌症的化疗药物,能够导致细胞发生DNA双链断裂(DSB)。DNA双链断裂的形成是许多抗癌药物发挥药效的重要标志。目前众多探讨证明,MMS能够诱导不同细胞株中p53依赖性信号通路介导的细胞凋亡的发生。然而,当p53基因敲除时,细胞仍然体现出对MMS药物相似的敏感性,以而证明在诱导细胞凋亡历程中p53非依赖性信号通路的有着。为了进一步探讨MMS诱导的细胞凋亡中p53非依赖性信号通路的具体机制,本实验建立了MMS诱导细胞凋亡的实验模型。实验选取了2种细胞株,分别为p53基因缺失的H1299细胞和Hep3B细胞。并确定了MMS染毒的5种浓度,分别为50μM、100μM、200μM、400μM和800gM。实验结果证明,在MMS染毒时间为12h,染毒浓度为50μM、100μM、200μM、400μM和800μM时,两种细胞株中均出现γH2AX焦点,即细胞发生不同程度的DNA损伤。在MMS染毒时间为12h,染毒浓度为400μM和800gM时,两种细胞株均发生细胞凋亡。这一细胞凋亡的历程涉及到线粒体膜通透性的降低,Caspase2蛋白以细胞核到细胞质的转移,细胞色素C的释放,以及Caspase9的剪切激活等。然而,MMS诱导的细胞凋亡不能够激活p53家族成员TAp73以及DNp73的参与。综上所述,MMS诱导的这两种细胞凋亡为p53非依赖性以及p73非依赖性的信号通路介导的,而凋亡的发生与Caspase2以细胞核到细胞质的转移激活及线粒体通路有关。关键词：甲磺酸甲酯论文p53论文Caspase2论文细胞凋亡论文
致谢4-5
摘要5-7
Abstract7-8
缩略语8-9
目次9-11
1 引言11-15
2 实验材料15-18
2.1 实验细胞系15
2.2 实验器材15
2.3 实验试剂15-16
2.4 试剂配制16-18
3 实验策略18-32
3.1 细胞培养18
3.2 细胞染毒处理18
3.3 细胞活力的检测18-19
3.4 细胞DNA损伤程度的检测19-23
3.5 细胞周期的检测23-25
3.7 线粒体膜电位的检测25
3.8 蛋白样品的制备25-26
3.9 蛋白样品的定量26-27
3.10 Western blotting策略27-32
4 实验结果32-51
4.1 MMS对细胞活力的影响32-33
4.2 MMS对细胞凋亡与坏死的影响33-35
4.3 MMS对细胞DNA损伤程度的影响35-38
4.4 MMS对细胞线粒体膜通透性的影响38-40
4.5 MMS对细胞凋亡发生相关蛋白表达的影响40-51
5 讨论51-55