本站原创摘要3-8
ABSTRACT8-21
符号说明21-23
第一章 文献综述23-48
1.1 单核细胞增生李斯特菌生理特点23-26
1.1.1 单核细胞增生李斯特菌的生物学特点23-24
1.1.2 单核细胞增生李斯特菌的流行病学24
1.1.3 单核细胞增生李斯特菌的致病机理24-26
1.2 细菌菌膜形成机制及菌膜特点26-33
1.2.1 细菌菌膜定义26-27
1.2.2 细菌粘附27-29
1.2.3 群体感应29-30
1.2.4 胞外多糖30-31
1.2.5 菌膜解体31-32
1.2.6 菌膜特点及抗性机理32-33
1.3 单核细胞增生李斯特菌菌膜探讨近况33-42
1.3.1 菌膜培养与观察策略33-35
1.3.2 影响单核细胞增生李斯特菌菌膜形成的因素35-38
1.3.3 菌膜形成相关基因的确定38-39
1.3.4 菌膜形成相关基因汇总39-42
1.4 氧胁迫与菌膜形成的分子机制42-46
1.4.1 氧胁迫的产生42
1.4.2 氧胁迫的危害42-43
1.4.3 抗氧胁迫系统43-44
1.4.4 超氧化物歧化酶44-45
1.4.5 菌膜与氧胁迫的联系45-46
1.5 探讨的目的、作用及思路46-48
第二章 SOD 缺失突变株的构建48-67
2.1 材料48-51
2.1.1 菌株与质粒48
2.1.2 主要培养基配制48-49
2.1.3 主要试剂49-50
2.1.4 仪器设备50-51
2.2 实验策略51-57
2.2.1 单核细胞增生李斯特菌 DNA 的提取51
2.2.2 质粒的提取与纯化51-52
2.2.3 同源重组片段引物设计及扩增52-53
2.2.4 同源重组质粒的构建53-55
2.2.5 重组质粒电转化单核细胞增生李斯特菌感受态细胞55-56
2.2.6 基因缺失突变株的筛选与鉴定56-57
2.3 结果与浅析57-64
2.3.1 同源重组质粒 pKSV7::sod14 的构建与鉴定57-60
2.3.2 SOD 缺失突变株的构建60-64
2.4 小结与讨论64-67
2.4.1 载体构建64-65
2.4.2 电转感受态细胞制备65
2.4.3 电转条件65-66
2.4.4 同源重组突变株的筛选66-67
第三章 ABC 转运子透性酶与 SOD 的相互联系67-82
3.1 材料67-70
3.1.1 菌株和质粒67
3.1.2 主要培养基配制67
3.1.3 主要试剂67-69
3.1.4 仪器设备69-70
3.2 策略70-76
3.2.1 单核细胞增生李斯特菌的培养70
3.2.2 总 RNA 的提取与鉴定70-71
3.2.3 DNA 的去除与检测71-72
3.2.4 cDNA 的反转录反应72
3.2.5 引物设计与优化72-74
3.2.6 RT-qPCR 浅析相关基因的表达74
3.2.7 数据处理与浅析74-75
3.2.8 单核细胞增生李斯特菌细胞总蛋白的提取75
3.2.9 蛋白质含量的测定75-76
3.2.10 非变性凝胶电泳的 SOD 酶谱浅析76
3.3 结果与浅析76-80
3.3.1 总 RNA 的提取及纯度浅析76-78
3.3.2 RT-qPCR 相关引物的设计与优化78
3.3.3 基因 sod 在Δ1771 中的转录水平表达78-79
3.3.4 SOD 在Δ1771 中的酶谱浅析79-80
3.3.5 lm.G_1771 在Δsod 中的转录水平表达80
3.4 小结与讨论80-82
第四章 SOD 在菌膜形成中的作用及功能浅析82-97
4.1 材料82-84
4.1.1 菌株82
4.1.2 培养基82-83
4.1.3 主要试剂83
4.1.4 仪器设备83-84
4.2 策略84-86
4.2.1 单核细胞增生李斯特菌的活化84
4.2.2 菌膜形成能力测定84-85
4.2.3 生长曲线测定85
4.2.4 生长能力观测85
4.2.5 ROS 测定85
4.2.6 抗氧胁迫(MV)能力测定85-86
4.2.7 氧化剂 MV 对菌膜形成的影响86
4.3 结果与浅析86-95
4.3.1 野生型与突变株的菌膜形成能力评价86-88
4.3.2 野生型与突变株的生长能力评价88-89
4.3.3 野生型与突变株 ROS 产量的比较89-90
4.3.4 野生型与突变株抗 MV 能力比较90-92
4.3.5 氧化剂 MV 对单核细胞增生李斯特菌菌膜形成的影响92-95
4.4 小结与讨论95-97
4.4.1 SOD 正调控菌膜的形成及与 ABC 转运子透性酶的联系95-96
4.4.2 氧化剂 MV 对菌膜形成的抑制作用96-97
第五章 双向电泳鉴定 SOD 影响的蛋白97-122
5.1 材料97-102
5.1.1 菌株和质粒97
5.1.2 主要培养基的配制97
5.1.3 主要试剂97-101
5.1.4 仪器设备101-102
5.2 策略102-108
5.2.1 单核细胞增生李斯特菌总蛋白的提取102
5.2.2 总蛋白的沉淀102-103
5.2.3 蛋白质含量的测定103
5.2.4 IPG 胶条 pH 范围选择103
5.2.5 双向电泳技术及操作103-106
5.2.6 胶体考染蛋白凝胶106-107
5.2.7 蛋白 2-DE 图谱差别蛋白点浅析107
5.2.8 质谱浅析及数据检索107
5.2.9 RT-qPCR 浅析相关蛋白的表达107-108
5.3 结果与浅析108-115
5.3.1 蛋白定量结果108-109
5.3.2 IPG 胶条 pH 范围的确定109-110
5.3.3 总蛋白质沉淀策略的确定110
5.3.4 野生型 G 和Δsod 突变株总蛋白 2-DE 比较110-112
5.3.5 野生型 G 和Δsod 突变株差别蛋白的鉴定112-114
5.3.6 SOD 对信号分子表达的影响114-115
5.4 小结与讨论115-122
5.4.1 Δsod 中表达量下降的蛋白115-118
5.4.2 Δsod 中表达量增加的蛋白118-119
5.4.3 SOD 对菌膜形成的调控途径119-122
第六章 氧胁迫相关基因在野生型和突变株中的表达122-139
6.1 材料122-124
6.1.1 菌株122
6.1.2 培养基122-123
6.1.3 主要试剂123
6.1.4 仪器设备123-124
6.2 策略124-125
6.2.1 菌膜状态和游离状态细胞的培养与收集124-125
6.2.2 常规培养与氧胁迫条件下细胞的培养与收集125
6.2.3 总 RNA 的提取与鉴定125
6.2.4 总 RNA 中 DNA 的去除与检测125
6.2.5 cDNA 的反转录合成125
6.2.6 氧胁迫相关基因的选取与引物设计125
6.2.7 RT-qPCR 浅析氧胁迫相关基因的表达125
6.2.8 数据处理与浅析125
6.3 结果与浅析125-133
6.3.1 菌膜状态总 RNA 的提取与反转录125-126
6.3.2 氧胁迫条件下总 RNA 的提取与反转录126-127
6.3.3 氧胁迫相关基因扩增效率计算127
6.3.4 菌膜形成对氧胁迫相关基因表达的影响127-128
6.3.5 MV 对氧胁迫相关基因表达的影响128-129
6.3.6 lm.G_1771 和 sod 对氧胁迫相关基因表达的影响129-133
6.4 小结与讨论133-139
6.4.1 氧胁迫相关基因在菌膜形成和抗 MV 方面的作用133-136
6.4.2 lm.G_1771 和 sod 对氧胁迫相关基因表达的影响136
6.4.3 SOD 正调控菌膜形成的作用机理136-139
第七章 结论与展望139-141
7.1 主要结论139
7.2 特点和革新139-140
7.3 展望140-141