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摘要：肝卵圆细胞在烧伤后的增殖情况及其对放射性多脏器伤的作用第一部分适用于烧伤实验的C57BL/6小鼠Meeh常数值的测定目的：测定适用于烧伤实验的C57BL/6小鼠Meeh常数(k)值。策略：24只6-12周正常C57BL/6小鼠,雌雄各半。实验前第3d在上午8点、中午12点、下午4点、晚上8点、次日凌晨0点和次日凌晨4点称小鼠体质量,依据24h内体质量波动规律将24只小鼠随机分为上午组、下午组和凌晨组,每组8只雌雄各半。实验日在上午8点(上午组)、下午4点(下午组)和次日凌晨0点(凌晨组)分别测定各组小鼠的体质量和全身体表面积(BSA)实际值,并据此计算其k值。分别运用4个常用k值(9.1、9.5、10和11.4)计算出每只小鼠的BSA计算值。结果：24h内小鼠的体质量差别有统计学作用,下午4点最低,凌晨0点最高。下午组小鼠k值大于上午组和凌晨组,差别有统计学作用(P0.05)。将小鼠常用k值(9.1、9.5、10和11.4)与本实验所得的3组k值分别进行比较,除9.5与凌晨组k值之间差别无统计学作用外,其余比较差别均有统计学作用(P0.05或P0.01)。将其他学者测算的C57BL/6小鼠k值(8.95和9.822)与本实验所得3个时点的k值分别进行比较,除9.822与下午组k值之间的差别无统计学作用外,其余比较差别均有统计学作用(P0.01)。利用小鼠常用k值计算出的BSA计算值和C57BL/6小鼠的BSA实测值之间的差值最大达到了BSA实测值的23%。结论：C57BL/6小鼠烧伤实验时可按实验时间不同选用不同的k值,上午k值宜为9.617,下午为9.802。第二部分重度烫伤后C57小鼠肝卵圆细胞的增殖情况目的：探讨重度烫伤和重度烫伤并脓毒症时C57BL/6小鼠肝内干细胞的增殖情况。策略：6周龄正常C57BL/6小鼠共58只,雌雄各半。小鼠被随机分为4组：肝干细胞阳性对照组(2雄2雌,共4只)、检测烫伤组(3雄3雌,共6只)、烫伤组(21雄21雌,共42只)和烫伤并脓毒症组(3雄3雌,共6只)。肝干细胞阳性对照组给予DDC鼠粮,其它三组小鼠给予标准实验鼠粮,全部小鼠均实验室饲养2周后实验。烫伤组行25%Ⅲ度背部烫伤；烫伤并脓毒症组行25%Ⅲ度背部烫伤联合盲肠结扎穿刺术。肝干细胞阳性对照组、检测烫伤组和烫伤并脓毒症组的小鼠肝脏标本在烫伤后24h获取；烫伤组小鼠肝脏标本则分别在烫伤后12h、24h、2d、3d、7d、14d和21d获取,每个时间点次随机选取6只(3雄3雌)小鼠取材。每只小鼠的肝脏标本均行HE染色和CK19免疫组化染色,光学显微镜下进行组织学观察。结果：肝干细胞阳性对照组全部小鼠的肝脏内均有散布的小细胞增殖区,增生的细胞呈卵圆细胞(OC)样,体积小,胞浆轻度嗜碱性染色,胞核呈浅蓝色,细胞核与胞浆的比值较大,CK19免疫组化染色阳性,增生的OC位于门管区并构成小胆管-终末胆管增生反应。在烫伤后24h取材的烫伤组和烫伤并脓毒症组中均各有1只雄性小鼠的部分肝脏切片偶见小范围门管区小细胞增生,其它检测烫伤组、烫伤组和烫伤并脓毒症组小鼠的肝脏内均未见小细胞增生,三组小鼠肝脏的CK19免疫组化染色均为阴性。结论：25%Ⅲ度烫伤和25%Ⅲ度烫伤并脓毒症时,C57BL/6小鼠肝内未见表达CK19抗原的肝OC增殖。第三部分外源性肝卵圆细胞对放射性多脏器损伤的作用目的：探讨C57BL/6小鼠全身外放射伤后移植肝卵圆细胞对机体的作用。策略：6周龄健康雌性C57BL/6小鼠共164只,12只小鼠给予DDC鼠粮,其余152只小鼠给予标准实验鼠粮,实验室饲养2周后进行实验。实验中移植用的肝干细胞有两类：卵圆细胞(OC)混合细胞(含OC、胆管上皮细胞、肝脏星形细胞、窦内皮细胞等来源于肝脏的细胞)和纯化建株的OC。12只喂养DDC鼠粮的小鼠组成肝OC增殖组,进行肝细胞分离实验,提供实验中用于移植的OC混合细胞。纯化建株的OC来自于第二军医大学胡以平教授的馈赠。标准实验鼠粮喂养的152只小鼠按实验要求在60Co放射源下分别进行5Gy、6Gy或9Gy的全身性外放射辐照并分入以下5部分实验中：9Gy全身外放射伤小鼠移植OC混合细胞的实验(对照组20只、OC混合细胞组20只)、9Gy全身外放射伤小鼠移植OC的实验(对照组20只、OC组20只)、6Gy全身外放射伤小鼠移植OC的实验(对照组20只、OC组20只)、5Gy全身外放射伤小鼠移植OC的实验(对照组10只、OC组10只)和9Gy全身外放射伤小鼠移植Hoechst33342染色的OC的实验(对照组6只、OC组6只)。本实验中所有细胞悬液均用PBS混悬,OC混合细胞悬液为1.0×107/ml单细胞悬液,用于9Gy全身外放射伤小鼠移植OC混合细胞的实验；OC悬液和Hoechst33342染色的OC悬液均为1.0×105/ml单细胞悬液,Hoechst33342染色的OC悬液用于9Gy全身外放射伤小鼠移植Hoechst33342染色的OC的实验,而OC悬液用于其它OC移植实验。本实验中的对照组小鼠经尾静脉注射PBS200μl/只；实验组小鼠经尾静脉注射细胞悬液200gl/只。在9Gy全身外放射伤小鼠移植OC混合细胞的实验、9Gy全身外放射伤小鼠移植OC的实验和6Gy全身外放射伤小鼠移植OC的实验中,观察每只小鼠的存活时间、每只死亡小鼠肝、脾、胃肠道的大体体现、以及辐照前第3天和辐照后第7天存活小鼠的外周血细胞计数。在5Gy全身外放射伤小鼠移植OC的实验中,于辐照前第3天、辐照后第7天、辐照后第14天和辐照后第21天行存活小鼠的外周血细胞计数检查。在9Gy全身外放射伤小鼠移植Hoechst33342染色的OC的实验中,辐照后第4天处死全部小鼠,运用荧光显微镜观察血涂片、胃、小肠、肝、胰、脾、双肾、双肺、心脏、四肢肌肉、皮肤和脑组织的冰冻切片以及骨髓细胞悬液中Hoechst33342染色的蓝色荧光细胞的分布情况；对小鼠全身外放射伤后第4天的小肠行HE染色并对肠损伤进行病理学评分。结果：9Gy全身外放射伤时,对照组、OC混合细胞组和OC组45%-50%的小鼠有着肉眼可见的肝出血点,全部小鼠均有小肠萎缩,辐照后第7天存活小鼠的WBC数为辐照前的0.55%-5.65%。9Gy全身外放射伤时,OC混合细胞组小鼠存活时间与对照组无统计学差别,辐照后第7天两组间血细胞计数亦没有差别。9Gy全身外放射伤时,OC组小鼠中位存活时间(8天)较对照组(6天)延长,二组间存活率有着统计学差别(P0.05),但辐照后第7天两组间血细胞计数没有差别。6Gy全身外放射伤时,OC组小鼠存活时间及辐照后第7天血细胞计数与对照组无统计学差别。5Gy全身外放射伤时,OC组外周血细胞计数在辐照后第7天、第14天和第21天与对照组均无统计学差别。Hoechst33342染色的OC移植入9Gy全身外放射伤机体后第4天,Hoechst染色细胞仅少量散在分布于肝脏和脾脏内,而血涂片、小肠、胰、双肾、双肺、心脏、四肢肌肉、皮肤、脑组织以及骨髓细胞悬液中均未见Hoechst染色蓝色荧光细胞。9Gy全身外放射伤后第4天,OC组的小肠损伤HE染色病理学评分为3.44±0.62,低于对照组的3.78±0.65,但二者间差别无统计学作用(P=0.14)结论：9Gy全身外放射伤时,C57BL/6小鼠出现肝损伤、小肠损伤和造血系统损伤等放射性多脏器伤,经尾静脉注射法移植2.0x104个OC可以延长机体的存活时间,移植OC组小肠损伤有减轻走势。不同辐照剂量导致放射性造血系统损伤时,外源性肝OC均未引起外周血细胞计数发生统计学作用上的变化。Hoechst33342染色法示踪OC的实验中,外源性肝OC在宿主体内“归巢”于肝脏。关键词：C57BL近交系小鼠论文烧伤论文体表面积论文肝脏论文干细胞论文卵圆细胞论文放射伤论文
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