摘要:目的:观察有氧游泳运动前后大鼠空间记忆能力及运动后大鼠海马内IL-6、IL-10的表达情况和小胶质细胞的活化状态,探讨有氧游泳运动对炎性衰老的调节作用和对衰老引起的空间记忆能力减退的改善作用,为运动预防衰老拓展新的思路。策略:将40只雄性SD大鼠随机分为衰老运动组(n=10)、衰老安静组(n=10)、对照运动组(n=10)、对照安静组(n=10),建立大鼠衰老模型并设立对照,运动组进行有氧游泳运动,安静组放予同等条件的浅水中。通过Morris水迷宫观察各组大鼠空间记忆能力的变化。冰上分离新鲜脑组织或多聚甲醛灌注固定取脑,前者经Westernblot反应,半定量浅析探讨有氧游泳运动后海马内IL-10的含量变化,后者经冰冻切片、免疫荧光染色,观察IL-6、IL-10蛋白的定位和分布表达规律以及小胶质细胞的活化状态。结果:⑴Morris水迷宫:造模前衰老运动组、衰老安静组、对照运动组、对照安静组四组大鼠逃避潜伏期、到达平台游过距离相互间均无统计学差别(P0.05)。造模并训练后,衰老安静组的逃避潜伏期时间较长,与对照运动组、对照安静组的差别具有统计学作用(P0.05),虽然衰老运动组的逃避潜伏期也较,但与衰老安静组的差别不显著(P0.05);衰老安静组到达平台游过距离较长,与衰老运动组、对照运动组及对照安静组相比均有统计学差别(P0.05);在逃避潜伏期、到达平台游过距离两组统计数据中,对照运动组、对照安静组两组之间没有显著的差别(P0.05)。定位航行实验中各组逃避潜伏期和到达平台游过距离的均数均呈随天数增加而减少的走势。各组空间探讨轨迹图中各组大鼠都具有目标象限的趋向性,在目标象限的轨迹较多。⑵免疫荧光:①IL-6:衰老安静组海马CA1区IL-6的阳性神经元数目较多,与衰老运动组、对照运动组、对照安静组相比有统计学差别(P0.05)。对照运动组中海马CA1区的阳性神经元数目较少,其与衰老运动组、衰老安静组和对照安静组均有统计学差别(P0.05)。衰老运动组和对照安静组比较,差别无统计学作用。②IL-10:对照运动组海马CA1区内的IL-10阳性神经元数目较多,与衰老安静组、对照运动组、对照安静三组相比较均有统计学差别(P0.05);衰老运动组的IL-10阳性神经元多于衰老安静组,差别有统计学作用(P0.05);衰老安静组中的IL-10阳性神经元数目少于其他三组,差别有统计学作用(P0.05)。③小胶质细胞:观察各组小胶质细胞阳性神经元的形态可见,衰老组的小胶质细胞呈现活化状态,即胞体较大,染色深,突起多较粗长,对照组的小胶质细胞活化状态不显著。⑶WesternBlot结果:在大鼠海马CA1区中,衰老运动组IL-10的表达量最高,与其他三组均有统计学差别(P0.05);对照运动组与其他各组相比表达量最低,差别具有统计学作用(P0.05);此外衰老安静组的表达量与对照运动组、对照安静组相比也有统计学差别(P0.05),但与对照安静组更为接近。结论:⑴衰老可导致大鼠学习记忆能力减退,有氧游泳运动能改善衰老大鼠的学习记忆能力,而对正常动物的认知能力没有显著作用;⑵促炎因子随着大鼠衰老表达量可能会有所上升;⑶有氧游泳运动对大鼠脑组织起到良性应激,能够推动抗炎因子的表达,在衰老历程中减轻了衰老大鼠的脑内炎症反应;⑷炎性衰老中的炎症反应可使小胶质细胞活化。关键词:大鼠论文炎性衰老论文游泳训练论文IL-6论文IL-10论文小胶质细胞论文
摘要6-8
Abstract8-10
前言10-11
材料与策略11-17
1. 材料与试剂11-12
1.1 实验动物及主要试剂11
1.2 主要仪器设备:11-12
2.衰老模型制作12
3.衰老模型建立历程中运动抗衰老12
4.行为学测试12-13
5. 免疫荧光染色13-14
5.1 灌注固定取材13
5.2 免疫荧光染色13-14
6.免疫印迹(WesternBlot)14-16
6.1 新鲜取材14
6.2 提取海马总蛋白14
6.3 蛋白含量的测定14
6.4 SDS-PAGE电泳14-15
6.5 转膜15
6.6 免疫反应15
6.7 化学发光,显影,定影15
6.8 内参蛋白β-Actin免疫印迹15-16
7.图像浅析和统计学处理16-17
7.1 免疫组织化学图像浅析16
7.2 WesternBlot条带图像浅析16
7.3 统计学浅析处理16-17
结果17-26
1. 实验动物一般情况17
2. Morris水迷宫结果17-20
2.1 大鼠视力及速度的比较17
2.2 大鼠空间学习记忆功能的比较17-20
3. IL-6、IL-10、CD11b/c的免疫荧光结果20-25
3.1 IL-6的免疫荧光结果20
3.2 IL-10的免疫荧光结果20-23
3.3 CD11b/c的免疫荧光结果23-25
4. IL-10的WesternBlot结果25-26
讨论26-29
结论29-30