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摘要：目的：百草枯(paraquat，PQ)：是我国农村广泛利用一种除草剂，对人毒性极大，因无特效解，故死亡率很高。目前世界上已有许多国家已禁止利用百草枯。百草枯中毒后损伤的主要脏器是肺，早期可导致急性肺损伤，晚期可致肺纤维化，患者最终出现呼吸衰竭。百草枯中毒所致急性肺损伤的发病机制还不清楚，一般认为百草枯中毒后在体内形成过多阳离子、超氧阴离子及羟自由基，诱导脂质过氧化反应，直接损害肺泡细胞，使肺泡上皮细胞分泌、合成肺泡表面活性物质减少有关。目前百草枯中毒的治疗策略主要包括洗胃、清除毒物、清除氧自由基、利用免疫抑制剂及激素，行血液透析、血液灌流。盐酸氨溴索是一种广泛运用治疗呼吸系统疾病的药物，具有祛痰功能。近年发现盐酸氨溴索还有抗炎和推动肺泡Ⅱ型细胞分泌，合成肺泡表面相关活性物质作用。SP-D是肺泡Ⅱ型细胞合成、分泌肺泡表面相关活性物质蛋白，人们发现SP-D在急性肺损伤中起着极重要作用。我们设计本实验用来观察盐酸氨溴索对大鼠百草枯中毒急性肺损伤SP-D及各相关指标的影响，并评价盐酸氨溴索对百草枯中毒治疗作用。策略：将120只体重在200-250g之间的雄性大鼠，随机分为三个实验组：（1）生理盐水组（NS组，n＝24）腹腔每日注入等容量0.9%生理盐水。（2）百草枯中毒组(PQ组，n＝48)：以30mg/㎏腹腔注入0.5%百草枯稀释液。（3）盐酸氨溴索治疗组（AT组，n=48）:百草枯染毒后每日腹腔注入盐酸氨溴索液，按40mg/㎏注入。PQ组与AT组再分别按时间点随机分为四组，分别为1d,3d,5d,7d实验组，每组均为12只。NS组也按1d,3d,5d,7d四个时间点随机分为四组，各时间点均为6只。抽取股静脉血用来检测WBC和PMN百分比。抽取股动脉血测定动脉血氧分压（PaO）。取大鼠的左肺行HE染色和免疫组化，用于观察肺组织形态学变化和SP-D在肺组织表达。右肺用western blot法检测肺组织中SP-D的含量。采取SPSS13.0统计软件进行浅析，采取单因素方差浅析进行组间比较，并运用均数±标准差对数据进行描述。以P﹤O.05表示有统计学作用。结果：1大鼠注射百草枯后及盐酸氨溴索治疗后体现大鼠注射百草枯后，食欲减退，呼吸急促，行动迟缓，反应迟钝，部分大鼠口、鼻有少量粘液性分泌物。百草枯中毒大鼠经盐酸氨溴索治疗后，症状减轻。NS组大鼠无异常体现。2静脉血液WBC计数和PMN百分比变化2.1静脉血液中WBC计数的变化NS组静脉血液WBC计数各时间点均无显著差别（P﹥0.05）。PQ组各相应时间点均显著高于NS组(P﹤0.01)。AT组WBC计数也增高，经盐酸氨溴索治疗后下降。但各个相应时间点仍高于NS组(P﹤0.01)，第一天AT组与PQ组无显著差别（P﹥0.05），第3、5、7天WBC计数均低于PQ组(P﹤0.01)。2.2静脉血液中PMN百分比的变化NS组PMN百分比各个时间点无显著差别（P﹥0.05）。PQ组PMN百分比第一天即开始升高，各个相应时间点与NS组相比均显著增高(P﹤0.01)。AT组第一天于PQ组无显著差别（P﹥0.05）。第5、7天显著下降(P﹤0.01)。但仍显著高于NS组各时间点(P﹤0.01)。2.3动脉血液中PaO的变化NS组动脉血液中PaO各个时间点无显著差别（P﹥0.05）。PQ组动脉血液中PaO逐渐下降，各相应时间点均显著低于NS组(P﹤0.01)。AT组PaO各相应时间点均低于NS组(P﹤0.01)。与PQ组相比：第1天两者无显著差别（P﹥0.05），第3、5、7天AT组PaO开始增高，两者相比有显著差别(P﹤0.01)。3肺组织病理形态学观察3.1肺的大体标本观察NS组肺标本色泽、大小形态正常，质地柔软，表面光滑，无出血及炎性渗出物,无充血水肿，切面无渗出物。PQ组肺标本呈暗红色，体积增大，质地韧，肺组织表面肿胀充血，部分肺叶可见点状出血，肺组织切面有浅红色液体渗出。AT组肺标本较百草枯中毒组颜色淡，充血水肿轻，部分肺叶可见点片状出血，切面有少许渗液。3.2HE染色光镜观察NS组可见肺泡结构完整，排列整齐，分布均匀，肺泡腔内无炎性细胞侵润。PQ组可见肺泡和肺间质充血水肿，肺泡间隔增厚并有中性粒细胞侵润，肺泡腔内粉红色渗液。严重时可见肺泡和肺间质充血水肿显著，部分肺泡萎陷，纤维母细胞增生，肺泡腔有大量血性渗液。AT组与PQ相比，肺泡和肺间质充血水肿均较轻。4免疫组织化学染色和western blot策略结果4.1免疫组化观察肺组织中SP-D的表达4.1.1光镜下观察SP-D在细胞膜和细胞浆中的表达。 NS组可见细胞膜和细胞浆中SP-D颗粒，PQ组SP-D在肺组织表达显著减弱。AT组在肺组织表达较PQ组增强。4.1.2NS组SP-D阳性细胞数各时间点无显著差别（P﹥0.05）。PQ组与NS组各相应时间点相比，阳性细胞数显著降低，有统计学差别(P﹤0.01)。AT组SP-D阳性细胞数各相应时间点均低于NS组有显著差别(P﹤0.01)；与PQ组相比，第1天，两者无显著差别（P﹥0.05），第3、5、7天AT组SP-D阳性细胞数各相应时间点较PQ组均增高，两者有显著差别(P﹤0.01)。4.2western blot法检测SP-D在肺组织表达NS组肺组织SP-D含量在各时间点无显著变化。PQ组肺组织SP-D含量与NS组相比，各时间点SP-D含量均显著下降，有统计学差别(P﹤0.01)。AT组肺组织SP-D含量第1、3天较PQ组相比无显著差别（P﹥0.05），经盐酸氨溴索治疗后，第5、7天两者有显著差别(P﹤0.01)。AT组较NS组有较大差别(P﹤0.01)。结论：1大鼠百草枯中毒后，静脉血WBC计数、多形核PMN百分比均显著增高，PaO2持续下降，说明百草枯中毒诱导炎症反应引起急性肺损伤主要因素之一。2通过免疫组化和Western blot法，发现百草枯中毒后SP-D在肺组织表达减弱，肺组织SP-D含量也显著降低，说明百草枯中毒肺泡表面活性物质合成减少，在百草枯中毒所致急性肺损伤中起重要作用。3经盐酸氨溴索治疗后，百草枯中毒大鼠WBC计数、PMN百分比均显著降低，PaO2升高，SP-D在肺组织表达增强，肺组织SP-D含量也逐渐升高，证明盐酸氨溴索具有抗炎及推动肺泡Ⅱ型细胞表面相关活性物质合成与分泌，对百草枯的治疗有效果。关键词：百草枯论文急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症论文肺泡Ⅱ型上皮细胞论文肺泡表面活性物质相关蛋白-D论文盐酸氨溴索论文
摘要4-8
ABSTRACT8-13
英文缩写13-14
前言14-15
材料与策略15-21
结果21-25
附图25-32
附表32-34
讨论34-37
结论37-38