摘要：目的探讨大鼠急性PQ中毒后ERS时PERK-eIF2a-ATF4信号转导通路的变化；明确UTI和/或Sal对PERK-eIF2a-ATF4信号转导通路的影响及其对肺损伤的作用。策略实验选用由吉林大学实验动物中心提供Wistar大鼠350只，体重(250±10)g，雌雄各半。造模时将大鼠随机分为7组，每组各50只。A组：空白对照组，一次性给予1ml生理盐水灌胃。每日二次1ml生理盐水腹腔注射。B组：PQ染毒组，一次性给予PQ溶液40mg/kg灌胃造模。每日二次给予1ml生理盐水腹腔注射。C组：UTI治疗组，大鼠PQ中毒后给予UTI（12万iu/kg），每日二次腹腔注射。D组：Sal（0.5mg/kg）治疗组，大鼠PQ中毒后1、3、5天，每日一次给予Sal（0.5mg/kg）1ml腹腔注射，一次1ml生理盐水腹腔注射。E组：Sal（1.0mg/kg）治疗组，大鼠PQ中毒后1、3、5天，每日一次给予Sal（1.0mg/kg）腹腔注射，一次1ml生理盐水腹腔注射。F组：UTI＋Sa（l0.5mg/kg）治疗组，在大鼠PQ中毒后给予UTI（12万iu/kg），每日二次腹腔注射；大鼠PQ中毒后1、3、5天，每日一次给予Sal（0.5mg/kg）腹腔注射。为保证每日二次腹腔注射，Sal给药时与UTI同时腹腔注射。（注：Sal与UTI同时腹腔注射时，UTI0.5ml、Sal0.5ml，体积共1ml）。G组：UTI＋Sal（1.0mg/kg）治疗组，在大鼠PQ中毒后给予UTI（12万iu/kg），每日二次腹腔注射；大鼠PQ中毒后1、3、5天，每日一次给予Sal（1.0mg/kg）腹腔注射。给药策略同F组。观察大鼠一般状态，于中毒后第7d取肺脏，行HE染色观察肺组织形态，免疫组织化学法观察肺组织PERK、P-elF2a、ATF4的表达，用Western blotting法检测肺组织中GRP78、PDI、PERK、P-elF2a、ATF4和CHOP蛋白的表达，行统计学浅析。结果①急性PQ中毒第7天，染毒组肺组织HE染色体现为炎性细胞大量渗出；肺组织中GRP78、PDI、PERK、P-elF2a、ATF4和CHOP蛋白表达较空白对照组高，差别有统计学作用（P0.05）。②GRP78、PDI、PERK、P-elF2a、ATF4和CHOP在空白对照组有基础表达。③UTI治疗组较染毒组炎症反应轻，GRP78、PDI、PERK、P-elF2a、ATF4和CHOP蛋白表达减少或不表达，差别有统计学作用（P0.05）。④Sal（1.0mg/kg）治疗组较染毒组炎症反应重，GRP78、PDI、PERK、P-elF2a、ATF4和CHOP蛋白表达多，差别有统计学作用（P0.05）。⑤Sal（0.5mg/kg）治疗组及Sal（（0.5mg/kg、1.0mg/kg）合用UTI治疗组炎症反应、上面陈述的蛋白表达情况介于Sa（l1.0mg/kg）治疗组与UTI治疗组之间，差别均有统计学作用（P0.05）。⑥病死率：空白对照组及UTI治疗组大鼠全部存活，大鼠存活状态尚可。染毒组、Sal（0.5mg/kg）治疗组、Sal（1.0mg/kg）治疗组、UTI+Sal（0.5mg/kg）治疗组、UTI+Sal（1.0mg/kg）治疗组，5组大鼠病死率分别是54.0%、70.0%、88.0%、58.0%、60.0%，各病死率之间比较，Sal（1.0mg/kg）治疗组病死率最高，差别有统计学作用（P0.05）；其余四组病死率之间比较，差别无统计学作用（P0.05）。结论①急性PQ中毒诱发ERS，PERK-eIF2a-ATF4信号转导通路增强，发生急性肺损伤；②UTI抑制ERS，使PERK-eIF2a-ATF4信号转导通路中相关蛋白表达减少，减轻急性PQ中毒肺损伤；③Sal增强ERS，使PERK-eIF2a-ATF4信号转导通路中相关蛋白表达增强，加重急性PQ中毒肺损伤。关键词：百草枯中毒论文内质网应激论文乌司他丁论文Salubrinal论文
摘要4-7
Abstract7-16
第1章绪论16-19
第2章 文献综述19-37
2.1 急性百草枯中毒的机制及治疗进展19-31
2.1.1 百草枯的理化特性及毒物代谢动力学19-20
2.1.2 急性百草枯中毒的机制20-24
2.1.3 急性百草枯中毒的治疗24-31
2.2 内质网应激及未折叠蛋白反应的探讨进展31-37
2.2.1 内质网应激31-32
2.2.2 UPR 信号通路调控机制32-37
第3章 实验材料37-41
3.1 实验动物37
3.2 主要药品与来源37-38
3.3 需配制的试剂38-39
3.4 仪器39-41
第4章 实验策略41-48
4.1 动物模型制备41-42
4.2 实验步骤42-46
4.2.1 石蜡切片制作基本历程42
4.2.2 HE 染色42-43
4.2.3 免疫组织化学法检测 PERK、P-EIF2A、ATF4 的蛋白表达43-44
4.2.4 WESTERN BLOTTING检测 GRP78、PDI、PERK、P-EIF2A、ATF4、CHOP 的蛋白表达44-46
4.3 统计学处理46-48
第5章 实验结果48-62
5.1 大鼠中毒体现及死亡情况48-49
5.2 肺组织病理转变49-50
5.3 肺组织免疫组化结果50-54
5.4 肺组织 WESTERN BLOTTING结果54-62
5.4.1 Western blotting 法检测大鼠肺组织中 GRP78 蛋白的表达54-55
5.4.2 Western blotting 法检测大鼠肺组织中 PDI 蛋白的表达55-56
5.4.3 Western blotting 法检测大鼠肺组织中 PERK 蛋白的表达56-58
5.4.4 Western blotting 法检测大鼠肺组织中 P-eIF2a 蛋白的表达58-59
5.4.5 Western blotting 法检测大鼠肺组织中 ATF4 蛋白的表达59-60
5.4.6 Western blotting 法检测大鼠肺组织中 CHOP 蛋白的表达60-62
第6章 讨论62-72
6.1 急性 PQ 中毒诱导 ERS 及 UPR63-66
6.2 急性 PQ 中毒对 PERK-EIF2A-ATF4 信号转导通路的影响66-68
6.3 UTI 对 PERK-EIF2A-ATF4 信号转导通路的影响68-69
6.4 SAL对 PERK-EIF2A-ATF4 信号转导通路的影响69-72
第7章 结论72-73
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