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谈述内酯土木香内酯在大鼠体内药动学与生物酶法提取当归活性成分新工艺库

收藏本文 2024-02-22 点赞:17380 浏览:65948 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:土木香和当归均为中医常用药材。土木香中挥发油的主要成分土木香内酯具有较好的驱虫、抗炎等药理活性,但其在动物体内相关的药动学特性尚未见报道,这在一定程度上限制了土木香内酯的临床探讨和制剂开发。当归作为我国临床常用中药,其药理活性已然确证,但目前对当归活性成分的提取工艺都是采取水煮或用大量有机溶剂针对某一种(或某一类)组分进行提取,致使药材利用率不高,活性成分损失较大,而且大量有机溶剂的利用对环境造成污染。综上所述,本课题主要以以下几个方面进行探讨:第一、本课题采取反相高效液相色谱法探讨土木香内酯经静脉注射和口服给药后在大鼠体内的药动学特性。以14mg/kg的剂量静脉注射土木香内酯后,其在大鼠体内的药动学模型符合二室模型,主要药动学参数为T_(1/2β)=35.897±6.965min, ClB=0.00223(L/kg)/min, AUC=6.464±0.109g·min·L~(-1), K_e=0.061±0.009min~(-1);以30mg/kg的剂量灌胃给药后,土木香内酯在大鼠体内的药动学模型符合一室模型,主要药动学参数为:T_(1/2)=44.999±7.017min, C_(max)=268.723±15.261μg/mL,T_(max)=31.385±9.643min。本课题通过对土木香内酯在大鼠体内经静脉注射和口服两种途径给药后的药动学特性进行探讨,为土木香内酯的进一步探讨开发提供论述依据。第二、本课题通过生物酶法处理当归,以阿魏酸和多糖提取率作为评价指标,探讨酶用量、酶解温度、酶解时间及pH等单因素对其提取率的影响,进而采取正交实验和筛选复合酶对工艺条件进行优化。本探讨所得新工艺将水提法与酶解法有效结合起来,使阿魏酸提取率与传统醇提法相当。而且本工艺可实现当归主要活性成分阿魏酸、藁本内酯和多糖的共提取,达到对当归的综合利用的目的。采取生物酶法单独提取当归多糖,通过单因素和正交实验,探讨所得工艺可使多糖提取率较传统提取策略提升7.52%。经MTT法评价生物酶法提取所得当归多糖对hela细胞的抑制活性,结果显示该多糖具有较好的抗肿瘤活性。第三、本课题以当归根、茎、叶及栽培土中筛选内生菌,然后就当归内生菌与其主要活性成分阿魏酸和藁本内酯的相关性进行探讨。实验首先确定无菌当归苗的最适栽培条件,然后利用筛选所得内生菌浸染无菌当归苗,培养14天后用高效液相色谱法测定当归苗中藁本内酯和阿魏酸含量的变化,并进行相关性浅析。结果表明,当归内生真菌和混合菌对活性成分(藁本内酯、阿魏酸)的产生有推动作用,其中内生真菌的推动作用更为显著,藁本内酯产量增加6.6倍,阿魏酸产量增加4.1倍。细菌和放线菌对活性成分的产生具有抑制作用。关键词:土木香内酯论文Hplc论文药动学论文当归论文酶论文内生菌论文无菌栽培论文

    摘要10-11

    Abstract11-13

    第1章 绪论13-19

    1.1 土木香内酯在大鼠体内的药代动力学探讨13-14

    1.1.1 土木香内酯介绍13

    1.1.2 药代动力学探讨概况13-14

    1.2 酶法提取当归活性成分的新工艺探讨14-17

    1.2.1 当归介绍14-16

    1.2.2 内生菌16-17

    1.2.3 中药探讨近况17

    1.3 探讨思路17-19

    1.3.1 土木香内酯在大鼠体内的药代动力学探讨17

    1.3.2 酶法提取当归活性成分的新工艺探讨17-19

    第2章 土木香内酯在大鼠体内的药动学探讨19-27

    2.1 引言19

    2.2 实验材料19-20

    2.2.1 样品19

    2.2.2 实验动物19

    2.2.3 主要试剂19

    2.2.4 试剂配制19

    2.2.5 主要仪器19-20

    2.3 实验策略20-22

    2.3.1 土木香内酯提取20

    2.3.2 色谱条件20-21

    2.3.3 血浆样品的制备策略21

    2.3.4 策略专属性实验21

    2.3.5 最低检测限和最小定量限21

    2.3.6 土木香内酯标准曲线的制备21

    2.3.7 精密度实验21-22

    2.3.8 准确度实验22

    2.3.9 回收率实验22

    2.3.10 土木香内酯在大鼠体内的药代动力学探讨22

    2.4 实验结果22-26

    2.4.1 策略的专属性22-23

    2.4.2 最低检测限和最小定量限23

    2.4.3 土木香内酯标准曲线的制备23

    2.4.4 精密度实验23-24

    2.4.5 准确度实验24

    2.4.6 回收率实验24-25

    2.4.7 土木香内酯在大鼠体内的药动学探讨25-26

    2.5 讨论26

    2.6 小结26-27

    第3章 酶法提取当归活性成分的新工艺探讨27-40

    3.1 引言27

    3.2实验材料27-28

    3.2.1 样品27

    3.2.2 主要试剂27-28

    3.2.3 主要仪器28

    3.2.4 试剂配置28

    3.3 实验策略28-32

    3.3.1 薄层扫描法检测提取液中的阿魏酸含量28-29

    3.3.1.1 薄层板的制备28

    3.3.1.2 标准曲线的绘制28-29

    3.3.1.3 策略的准确度(回收率)实验29

    3.3.1.4 策略的精密度实验29

    3.3.1.5 样品中阿魏酸的含量测定29

    3.3.2 纤维素酶提取当归中的阿魏酸29-30

    3.3.2.1 酶解时间对阿魏酸提取率的影响29

    3.3.2.2 酶解温度对阿魏酸提取率的影响29

    3.3.2.3 pH 对阿魏酸提取率的影响29

    3.3.2.4 酶浓度对阿魏酸提取率的影响29-30

    3.3.2.5 正交实验30

    3.3.3 比较不同种类酶提取阿魏酸提取率变化30

    3.3.4 复合酶法与传统提取法提取阿魏酸30-31

    3.3.5 生物酶法提取当归中主要活性成分31-32

    3.3.5.1 制作藁本内酯标准曲线31

    3.3.5.2 制作当归多糖标准曲线31

    3.3.5.3 生物酶法提取当归活性成分新工艺31-32

    3.4 实验结果32-38

    3.4.1 阿魏酸标准曲线的绘制32

    3.4.2 准确度(回收率)实验结果32

    3.4.3 精密度实验结果32-33

    3.4.4 纤维素酶辅助提取阿魏酸实验33-35

    3.4.4.1 酶解时间对阿魏酸提取率的影响33

    3.4.4.2 酶解温度对阿魏酸提取率的影响33-34

    3.4.4.3 pH 对阿魏酸提取率的影响34

    3.4.4.4 酶浓度对阿魏酸提取率的影响34

    3.4.4.5 正交实验结果34-35

    3.4.5 其它种类酶单一辅助提取阿魏酸实验35-36

    3.4.6 复合酶法与传统提取法提取阿魏酸36-37

    3.4.7 生物酶法提取当归中主要活性成分实验结果37-38

    3.4.7.1 藁本内酯标准曲线的制备37-38

    3.4.7.2 当归多糖标准曲线38

    3.4.7.3 生物酶法提取当归活性成分新工艺38

    3.5 小结38-40

    第4章 当归多糖的酶法提取新工艺及其抗肿瘤活性探讨40-46

    4.1 引言40

    4.2 实验材料40-41

    4.2.1 样品40

    4.2.2 主要试剂40

    4.2.3 细胞系及培养40

    4.2.4 主要仪器40-41

    4.3 实验策略41-42

    4.3.1 当归多糖样品含量测定及得率的测定41

    4.3.2 酶法提取当归多糖单因素实验41-42

    4.3.2.1 不同浓度纤维素酶对当归多糖得率的影响41

    4.3.2.2 不同酶解时间对当归多糖得率的影响41

    4.3.2.3 不同酶解温度对当归多糖得率的影响41

    4.3.2.4 不同 pH 对酶法提取当归多糖的影响41-42

    4.3.3 酶法提取当归多糖正交实验42

    4.3.4 当归多糖抗肿瘤活性评价42

    4.4 实验结果42-45

    4.4.1 酶法提取当归多糖单因素实验结果42-44

    4.4.1.1 不同浓度纤维素酶对当归多糖得率的影响42-43

    4.4.1.2 不同酶解时间对当归多糖得率的影响43

    4.4.1.3 不同酶解温度对当归多糖得率的影响43

    4.4.1.4 不同 pH 对当归多糖提取的影响43-44

    4.4.2 酶法提取当归多糖正交实验结果44

    4.4.3 当归多糖抗肿瘤活性实验结果44-45

    4.5 小结45-46

    第5章 当归内生菌与其活性成分相关性浅析46-55

    5.1 引言46

    5.2 实验材料46-47

    5.2.1 样品46

    5.2.2 主要试剂46

    5.2.3 培养基和试剂配制46-47

    5.2.4 主要仪器47

    5.3 实验策略47-49

    5.3.1 无菌当归苗最适培养条件的筛选47-48

    5.3.1.1 种子去翅与否对其萌发率影响的考察47-48

    5.3.1.2 消毒时间对种子萌发率影响的考察48

    5.3.1.3 最佳壮苗培养基选择48

    5.3.2 当归内生菌的分离及内生菌与当归活性成分相关性浅析48-49

    5.3.2.1 当归内生菌的初步筛选与富集48

    5.3.2.2 制作 Hplc 法检测阿魏酸标准曲线48-49

    5.3.2.3 当归内生菌与其活性成分相关性浅析49

    5.4 实验结果49-53

    5.4.1 无菌当归苗的最适培养条件的筛选49-51

    5.4.1.1 种子去翅与否对其萌发率影响的考察49-50

    5.4.1.2 消毒时间对种子萌发率的影响50

    5.4.1.3 最佳壮苗培养基的选择50-51

    5.4.2 当归内生菌的分离及内生菌与当归活性成分相关性浅析51-53

    5.4.2.1 当归内生菌的初步筛选与富集51-52

    5.4.2.2 制作阿魏酸标准曲线52

    5.4.2.3 当归内生菌与其活性成分相关性浅析52-53

    5.5 小结53-55

    全文总结55-56

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