本站原创摘要4-5
Abstract5-6
英文缩写词6-11
第1章 绪论11-21
1.1 艾滋病及 HIV-1 病毒介绍11-13
1.1.1 艾滋病及其流行情况11
1.1.2 HIV-1 病毒的结构11-12
1.1.3 HIV-1 病毒的生活周期12-13
1.2 基于 RNA 的抗 HIV-1 基因治疗探讨进展13-17
1.2.1 反义 RNA 在抗 HIV-1 基因治疗中的运用14
1.2.2 核酶在抗 HIV-1 基因治疗中的运用14-15
1.2.3 RNA 诱饵在抗 HIV-1 基因治疗中的运用15
1.2.4 RNA 干扰及其在抗 HIV-1 基因治疗中的运用15-17
1.3 HIV-1Vif 蛋白探讨进展17-19
1.3.1 HIV-1 Vif 蛋白的结构17-18
1.3.2 HIV-1 Vif 蛋白的生物学功能18-19
1.4 探讨目的及内容19-20
1.4.1 探讨目的19
1.4.2 探讨内容19-20
1.5 探讨技术路线20-21
第2章 靶向 HIV-1 vif 基因的小干扰 RNA表达质粒的构建21-33
2.1 实验材料21-22
2.1.1 实验菌株与质粒21
2.1.2 工具酶与试剂21
2.1.3 小干扰 RNA 序列合成与测序21
2.1.4 主要仪器21-22
2.1.5 培养基与所需液体的配制22
2.2 实验策略22-28
2.2.1 针对 vif 基因的小干扰 RNA 表达质粒 pSUPER.neo.retro-shRNA 的构建22-26
2.2.2 转化与菌落挑取26
2.2.3 碱裂解法小提质粒26-27
2.2.4 质粒的鉴定27
2.2.5 中提质粒27-28
2.2.6 质粒转染28
2.3 实验结果28-30
2.3.1 vif 基因特异性 pSUPER.neo.retro-shRNA 的构建28-30
2.3.2 荧光显微镜间接检测 shRNA 的表达30
2.4 讨论30-31
2.5 本章小结31-33
第3章 靶点特异性的 siRNA对 HIV-1 vif 基因表达的抑制作用33-49
3.1 实验材料33-35
3.1.1 细胞株和质粒33
3.1.2 主要仪器33-34
3.1.3 实验相关试剂34-35
3.2 实验策略35-41
3.2.1 细胞培养35
3.2.2 细胞转染35-36
3.2.3 Western Blot 检测36-38
3.2.4 Real-time PCR38-40
3.2.5 siRNA 对 HIV-1 检测病毒抑制作用检测40-41
3.3 实验结果41-47
3.3.1 Western Blot 检测 Vif 蛋白表达41-43
3.3.2 Real-time PCR 技术对 vif mRNA 拷贝数进行相对定量43-45
3.3.3 siRNA 对 HIV-1 检测病毒感染力的影响45-47
3.4 讨论47-48
3.5 本章小结48-49
结论49-51