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摘要：目的：了解本地区耐多药大肠埃希菌(Escherichia cop，E．cop)产质粒AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）近况及其基因型分布，浅析产AmpC酶大肠埃希菌对常用抗生素的耐药特点，为临床合理运用抗生素和防止大肠埃希菌耐药提供论述依据。策略：1.初筛试验：根据美国国家临床实验室标准委员会（the National Committee for cpnicalLaboratory Standards, NCCLS）推荐的纸片扩散法（kerby-Bauer纸片扩散法）检测71株大肠埃希菌对头孢西丁的耐药性，即抑菌环≤18mm为可疑产AmpC酶阳性菌株。2.三维试验：根据Coudron等推荐的头孢西丁三维试验策略，通过大肠埃希菌的β-内酰胺酶提取物能否水解头孢西丁（FOX）来判定其是否产AmpC酶，以而检测出产AmpC酶菌株。3.纸片扩散法（Kerby-Bauer法,K-B法）：测定本地临床分离71株大肠埃希菌对头孢噻肟(CTX)、头孢吡肟（FEP)、头孢西丁（FOX)、氨曲南（ATM)、亚胺培南（IPM)、庆大霉素（GEN)、阿米卡星（AMK)、链霉素（S)、环丙沙星（CIP）、左氧氟沙星(LEV)共10种抗菌药物的耐药性并筛选出产AmpC酶菌株。4. PCR技术：检测三维试验阳性菌株的AmpC酶基因。根据6种质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR、FOX的基因设计6对特异性引物，采取普通质粒小提试剂盒提取大肠埃希菌质粒DNA用于PCR反应模板。各标本分别利用六对设计好的引物扩增，阳性扩增片段长度分别为520bp、462bp、405bp、346bp、302bp、190bp。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，紫外线检测仪观察结果。5.基因测序：分别取质粒AmpC酶基因扩增阳性的菌株的PCR扩增产物用核酸定量仪测得DNA浓度300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序。结果：1.产AmpC酶菌株情况：在71株大肠埃希菌中初筛阳性产AmpC酶菌株共11株，通过头孢西丁三维试验分离出产AmpC酶的菌株8株，占总菌株数11.27%。2.药敏结果：（1）71株大肠埃希菌药敏结果显示对亚胺培南全敏感，阿米卡星，头孢西丁，氨曲南，头孢吡肟，敏感率较高均大于59.15%，较低的是头孢噻肟，链霉素，庆大霉素，环丙沙星，左氧氟沙星；（2）耐药方式中以耐多药菌株24株（33.80%）和双耐菌株25株为主（33.80%），其中耐多药方式的表型GEN+CTX+LEV (16株，22.54%)为主；（3）三维试验阳性菌株（产AmpC酶菌株）对多种常用抗生素的耐药率显著高于非产AmpC酶菌株（χ~2检验，P＜0.05)。3.PCR检测AmpC酶基因情况：对产AmpC酶8株菌株行质粒AmpC酶基因PCR扩增，仅2株扩增出405bp的目的片段，测序结果显示2株均为DHA-1型，其余6株未扩增出目的片段。结论：1.本地区临床分离的大肠埃希菌中产质粒介导AmpC酶的情况相对较少，但多重耐药现象突出。2.产AmpC酶菌株对常用抗生素的耐药率显著高于非产AmpC酶菌株。3.本地区临床分离的大肠埃希菌质粒介导的Amp酶的基因型仅发现DHA-1型，均来源于耐多药菌株。关键词：大肠埃希菌论文质粒论文AmpC酶基因论文多重耐药论文
摘要4-6
Abstract6-8
前言8-10
材料与策略10-18
结果18-26
讨论26-32
结论32-33