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摘要：为了探索建立、价廉而易操作的猪卵母细胞玻璃化冷冻方案,本研究以猪体外成熟MII期卵母细胞为试验,着重从冷冻保护剂、冷冻载体、玻璃化冷冻前预处理(化学去脂)等出发,开展了如下四个的试验。(1)试验一研究了化学去脂(chemicaldeppation)对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻的影响。结果:①存活率:化学去脂组和冷冻组、离心冷冻组差异不(P0.05)②卵裂率:化学去脂组和冷冻组、离心冷冻组差异(P0.05),离心冷冻组和冷冻组差异不(P0.05)③囊胚率:化学去脂组和冷冻组差异(P0.05),化学去脂组和冷冻组差异不(P0.05)。结果:化学去脂后有助于提高猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻效果。(2)试验二比较了开放式拉长细管法(Open pulled straws,OPS)与冷冻帽(Cryotop)、自制载体Cryotip用于猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻的效果。结果:自行研制的冷冻片(Cryotip)与OPS(对照组1)、Cryotop(对照组2)之间在存活率、卵裂率和囊胚率各组之间差异均不(P0.05),自制载体具有和成品载体一样的冷冻效果,可以取代昂贵的商业化载体用于卵母细胞玻璃化冷冻。(3)研究了ES1+VS1、ES2+VS2、ES2+VS3、ES2+VS4四种冷冻保护剂的组合对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻发育效果的影响。结果:①存活率、卵裂率:ES1+VS1、ES2+VS2、ES2+VS3、ES2+VS4各组差异均不(P0.05)②E S2+VS2、ES2+VS3与ES1+VS1(对照组)囊胚率上差异(P0.05),结果用不含有DMSO的冷冻保护剂冷冻猪MII期卵母细胞也是可行的。(4)分别运用含不同糖份的冷冻复苏液实施玻璃化冷冻复苏,研究含不同糖份的冷冻保护剂对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻发育效果的影响。结果:①海藻糖、聚蔗糖(ficoll 400)与蔗糖(对照组)在存活率、卵裂率和囊胚率各组之间差异均不(P0.05)②在海藻糖和蔗糖的冷冻保护剂中的试验中均了囊胚,而在聚蔗糖中囊胚。试验:运用海藻糖玻璃化冷冻猪MII期卵母细胞是可行的。综上所述,本研究中选用Cryotop作玻璃化冷冻载体,使用EG+DMSO+蔗糖海藻糖冷冻保护剂,并在猪的MII期卵母细胞玻璃化冷冻之前对其实施预处理(化学去脂),成功建立了猪的MII卵母细胞、经济、稳定的玻璃化冷冻复苏及体外培养技术体系。关键词：猪MII期卵母细胞论文化学去脂论文玻璃化冷冻论文冷冻载体论文冷冻保护剂论文
中文摘要5-7
Abstract7-11
英文缩略词表11-12
文献综述12-21
引言21-23
1 与方法23-34
1.1 试验23
1.2 主要试剂与溶液23
1.3 主要仪器23-24
1.4 试剂与溶液配制24-27
1.5 方法27-30
1.6 统计分析30
1.7 试验设计30-34
2 结果34-39
2.1 化学去脂对猪MII 期卵母细胞玻璃化冷冻的影响34-35
2.2 自制新型冷冻载体对猪MII 期卵母细胞的冷冻效果评价35-36
2.3 不同冷冻保护剂对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响36-37
2.4 不同糖份对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响37-39
3 讨论39-43
3.1 化学去脂对猪MII 期卵母细胞玻璃化冷冻的影响39-40
3.2 自制新型冷冻载体对猪MII 期卵母细胞的冷冻效果评价40-41
3.3 不同冷冻保护剂对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响41
3.4 不同糖份对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响41-43
4 43-44