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摘要：本实验东方蝾螈(Cynops orientaps)作为研究对象,探讨KIF3A在其精子发生中的克隆和表达研究。东方蝾螈为有尾两栖动物,在两栖动物进化中具有特殊的角色。近年来有尾两栖类在进化中作用的研究已经研究热点之一。动物的生殖存在一定的保守性,因此选取精子发生作为研究的模式系统有助于对不同物种生殖进化的比较。在哺乳动物精子发生中,驱动蛋白参与了顶体和细胞核的形态建成,而在两栖类中,驱动蛋白的作用研究尚属空白。本研究中,不同物种中KIF3A的已知蛋白序列信息,利用兼并PCRRACE的方法,证实了东方蝾螈中确实存在一种与KIF3A具有同源性的马达蛋白(KIF3A类似物),并了其基因的cDNA全长(co-kif3a)。cDNA全长2193bp,包括一个56bp的5’非翻译区(UTR),一个编码691个氨基酸的2073bp开放阅读框(ORF),以及一个64bp的3’非翻译区。软件计算出的蛋白分子质量为79kD,预测的等电点为6.8,蛋白含有检测定的ATP位点和微管位点,与埃及伊蚊,小鼠,爪蟾,人,斑马鱼分别有55.9%,90.9%,89.9%,91.3% and 85.7%的性。来自不同物种的KIF3A同源蛋白序列构建的系统进化树,东方蝾螈KIF3A马达蛋白与非洲爪蟾亲缘关系最近。RT-PCR结果,co-kif3a在检测的组织中都能表达,在精巢中的表达量相对最高,在肝、肌肉和卵中表达丰富,在心脏和脾中弱表达,在肠中似乎微弱表达。精子形成中mRNA的原位杂交分析：早期精细胞中,信号主要在核膜上表达,核内也有；中期精细胞中,mRNA在尾部密集集聚；在纵向拉长和横向压缩逐步加强的后期精细胞中,mRNA信号在尾部依然很强；成熟精子中,信号微弱。因此,co-kif3a在精子形成中特定阶段的表达暗示着马达蛋白在一些的细胞结构重组中的潜在功能,可能参与纤毛的形成和鞭毛的组装和维持。关键词：东方蝾螈论文精子发生论文驱动蛋白论文KIF3A论文
致谢4-5
摘要5-6
Abstract6-7
目次7-9
1 前言9-22
1.1 两栖动物的精子发生9-11
1.2 驱动蛋白概述11-16
1.3 KIF3A的功能概述16-22
2 引言22-24
3 和方法24-31
3.1 24-25
3.2 实验方法25-31
4 实验结果31-41
4.1 co-kif3a全长cDNA和蛋白序列分析31-35
4.2 co-kif3a在不同组织中的表达情况35-36
4.3 电镜结果36-38
4.4 石蜡切片观察和co-kif3a的mRNA表达的原位杂交分析38-41
5 讨论41-46
5.1 co-kif3a全长cDNA和蛋白序列分析41-42
5.2 co-kif3a在不同组织中的表达情况42
5.3 电镜结果42-43
5.4 石蜡切片观察和co-kif3a的mRNA表达的原位杂交分析43-46
6 46-47