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摘要：蛋白尿是肾小球滤过屏障受损的标志。足细胞是构成肾小球滤过膜机械和电荷屏障的组成。一系列研究,足细胞从基底膜脱落、数目减少是导致蛋白尿和肾小球硬化最的病理基础之一。α3β1整合素是由足细胞表达的黏附于基底膜的主要受体,对减少足细胞的剥离和脱落、维持GBM结构和功能的完整性起作用。近年来,他汀类药物(即HMG-CoA还原酶抑制剂)对足细胞的作用逐渐研究的热点,但其对足细胞的作用及其机制尚未完全阐明。文献报道大鼠注射嘌呤霉素(PAN)后产生与人类FSGS的严重蛋白尿,是嘌呤霉素特定损伤足细胞,导致足细胞足突缺失,细胞骨架破坏以及滤过膜蛋白的异常分布,从而为研究FSGS的发生机制了很好的实验模型。【目的】1.观察嘌呤霉素(PAN)对足细胞β1整合素、活性氧簇(ROS,reactive oxygen species)表达的影响。2.观察氟伐他汀(fluvastatin,FLV)干预对嘌呤霉素刺激下足细胞β1整合素、ROS表达的影响。3.探讨足细胞β1整合素表达与足细胞内ROS表达的关系。【方法】1.足细胞的培养与传代:细胞生长在含胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠(ITS,胰岛素5μg/ml、转铁蛋白5μg/ml和亚硒酸钠5ng/ml)、10%胎牛血清、100 U/ml青链霉素、100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养液中,在5%CO_2、33℃培养孵箱传代培养。然后转入37℃、5%CO_2培养孵箱分化培养至少10d后实验。分化成熟的足细胞以无血清RPMI1640培养基同步化处理12h用于实验。2.足细胞的分组与干预:将细胞分为以下4组:①正常对照组;②DMSO(1mg/ml)对照组;③PAN(1.0μg/ml)组:PAN分别培养足细胞12、24、48、72h;④PAN(1.0μg/ml) + FLV(1×10~(-8)～1×10~(-5) M)组,嘌呤霉素分别与不同浓度氟伐他汀共同培养足细胞48h。用Western印迹和DCFHDA(2’,7’-二氯荧光素-3’,6’-二乙酸酯)分别检测以上4组足细胞β1整合素和活性氧簇(ROS,reactive oxygen species)的表达。3. MTT(3-(4,5-二-2-噻唑)-2,5-二溴化四唑,简称噻唑蓝)法检测足细胞活力,其分组为:①正常对照组;②DMSO对照组;③PAN(1.0μg/ml)组;④PAN(1.0μg/ml)+ FLV(1×10~(-8)～1×10~(-5) M)组;⑤FLV(1×10~(-8)～1×10~(-5) M)组,以上5组分别培养12、24、48、72h。【结果】1.嘌呤霉素对足细胞β1整合素表达的影响(Western Blot)与正常对照组相比,嘌呤霉素刺激足细胞24h,β1整合素表达即有下降(P0.05),48h、72hβ1整合素表达继续下降(P0.05 ),嘌呤霉素作用12h足细胞β1整合素表达无改变(P 0.05)。2.氟伐他汀对嘌呤霉素刺激下足细胞β1整合素表达的影响(Western Blot)各组分别作用48h后,与正常对照组相比,DMSO对足细胞β1整合素表达无影响(P0.05);嘌呤霉素作用48h,β1整合素表达下降(P0.05)。氟伐他汀干预后,β1整合素表达有上调,且氟伐他汀浓度为1×10-7 M时作用最(P0.05 )。3.嘌呤霉素对足细胞内ROS表达的影响与正常对照组相比,嘌呤霉素作用12h,细胞内ROS开始升高,但无统计学(P0.05),至24h有统计学(P 0.05),48h达峰值,72h足细胞内ROS开始下降,但仍高于正常对照组(P 0.05)。4.氟伐他汀对嘌呤霉素刺激下人足细胞内ROS表达的影响与正常对照组比较,嘌呤霉素作用48h后,足细胞内ROS表达升高(P0.05)。DMSO作用48h后,足细胞内ROS表达无改变(P 0.05)。经氟伐他汀干预,足细胞内ROS的表达下降,且氟伐他汀浓度为1×10~(-7)M作用最(P0.05)。5.足细胞β1整合素表达与ROS表达性分析性分析发现,PAN组以及PAN+FLV组足细胞β1整合素与细胞内ROS表达成负。6.氟伐他汀对足细胞活力的影响MTT结果:与正常对照组比较,DMSO以及氟伐他汀浓度为1×10~(-8)M和1×10~(-7)M对足细胞的活力无影响(P0.05),氟伐他汀浓度为1×10~(-6)M和1×10~(-5)M、PAN组、PAN+FLV组,在24h均抑制足细胞活力(P0.05)。与PAN组相比,嘌呤霉素与1×10~(-7)M氟伐他汀共同作用48h足细胞活力有的改善(P0.05)。【】嘌呤霉素可致足细胞β1整合素表达下降、ROS表达升高。氟伐他汀可上调嘌呤霉素作用下β1整合素的表达、抑制嘌呤霉素作用下足细胞内ROS的表达。足细胞β1整合素的表达与足细胞内ROS的表达成负。氟伐他汀上调β1整合素的表达,保护足细胞。此机制与氟伐他汀抑制足细胞内ROS的表达。关键词：氟伐他汀论文足细胞论文嘌呤霉素论文β1整合素论文活性氧簇论文
缩略词5-7
中文摘要7-10
英文摘要10-14
前言14-15
与方法15-26
结果26-31
讨论31-35
35-36