本站原创摘要4-5
Abstract5-7
英文缩略词7-10
1 文献综述10-16
1.1 鱼类泛素系统的探讨概况10-13
1.1.1 泛素-蛋白酶体降解途径10-11
1.1.2 泛素-蛋白酶系统统的生物学功能11-12
1.1.3 泛素系统在病毒感染中的作用12-13
1.1.4 鱼类泛素的发现13
1.2 NEDD4 BINDING PROTEIN 的探讨进展13-15
1.3 本探讨的目的和作用15-16
2 Ci N4BP1 的克隆与表达浅析16-42
2.1 实验材料16-19
2.1.1 实验用鱼16
2.1.2 质粒载体和受体菌16-17
2.1.3 实验仪器17-18
2.1.4 主要试剂及试剂盒18
2.1.5 所有溶液及试剂的配制策略18-19
2.1.6 主要溶液及器皿的预处理19
2.2 试验策略19-30
2.2.1 草鱼总 RNA 的提取19
2.2.2 DH5α感受态的制备19
2.2.3 Ci N4BP1 的 RACE 克隆19-26
2.2.4 Ci N4BP1 的原核表达26-30
2.3 结果与浅析30-40
2.3.1 草鱼总 RNA 的提取及反转录30-31
2.3.2 Ci N4BP1 的克隆结果31-32
2.3.3 Ci N4BP1 的生物信息学浅析32-35
2.3.4 Ci N4BP1 的原核表达35-40
2.4 讨论40-42
3 Ci N4BP1 的差别表达探讨42-49
3.1 实验材料42
3.1.1 病毒和细胞42
3.1.2 实验鱼42
3.1.3 实验仪器、试剂盒及主要溶液的配制42
3.2 实验策略42-45
3.2.1 草鱼肾细胞 CIK 的培养42
3.2.2 草鱼呼肠孤病毒的采集及纯化42-43
3.2.3 引物设计43
3.2.4 样品采集43
3.2.5 样品总 RNA 的提取及 cDNA 一链的合成43-44
3.2.6 半定量 RT-PCR 检测 Ci N4BP1 的组织分布44
3.2.7 实时定量 PCR 检测 Ci N4BP1 的组织表达差别44
3.2.8 实时定量 PCR 检测 Ci N4BP1 的细胞表达差别44-45
3.2.9 数据统计与浅析45
3.3 结果与浅析45-47
3.3.1 草鱼呼肠孤病毒感染前后 Ci N4BP1 的组织分布差别45
3.3.2 草鱼呼肠孤病毒感染后 Ci N4BP1 在各个组织中的时间表达差别45-46
3.3.3 草鱼呼肠孤病毒感染后 Ci N4BP1 在细胞中的时间表达差别46-47
3.4 讨论47-49
4 Ci N4BP1 的亚细胞定位及其对 GCRV 主要结构基因转录的影响49-57
4.1 实验材料49-50
4.1.1 病毒和细胞49
4.1.2 质粒载体和受体菌株49-50
4.1.3 主要试剂、工具酶及试剂盒50
4.1.4 主要溶液和试剂的配制50
4.1.5 实验仪器50
4.2 实验策略50-52
4.2.1 CI N4BP1 的亚细胞定位50-52
4.2.2 对 GCRV 主要结构基因转录的影响52
4.3 结果与浅析52-55
4.3.1 Ci N4BP1 在 CIK 细胞中的定位52-54
4.3.2 Ci N4BP1 对 GCRV 主要结构基因转录的影响54-55
4.4 讨论55-57
5 结论57-58