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摘要：探讨病毒准种及其耐药种群的动态分布，是阐明病毒耐药和病毒学突破发生、进展的关键所在。本论文主要以两部分进行探讨：一、未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBVcccDNA和血清HBV DNA逆转录酶(reverse transcriptase，RT)区准种特性的比较浅析；二、慢性乙型肝炎患者治疗前后肝内HBV cccDNA耐药相关位点变异的观察。一、未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBV cccDNA和血清HBV DNA RT区准种特性的比较浅析目的了解未经核苷类似物抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBV cccDNA和血清HBV DNART区准种的组成情况以及两者之间的联系。策略纳入26例未经核苷类似物抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者，留取其肝穿组织和血清，并分别抽提肝组织HBV tDNA和血清HBV DNA；先以不降解质粒的ATP依赖DNA酶（PSAD）酶切纯化肝组织HBV tDNA，利用实时荧光定量PCR法定量肝内HBV cccDNA和血清HBVDNA，根据定量结果，以跨双缺口引物行巢式聚合酶链反应(PCR)扩增HBV cccDNA的RT区，以非跨双缺口引物行巢式PCR扩增血清HBV DNA的RT区；运用琼脂糖凝胶电泳回收目的片段，然后对目的片段进行克隆，主要包括重组质粒的构建、小量制备、酶切鉴定，最后对目的片段进行直接测序；根据测序结果，浅析肝内HBV cccDNA和血清HBV DNART区准种的组成并比较浅析两者间的联系。结果肝内HBV cccDNART区准种数为4～22，血清HBV DNA RT区准种数为3～20，肝内HBV cccDNA RT区和血清HBV RT区两者的准种数差别尚无统计学作用（p0.05）；肝内HBV cccDNA和血清HBV DNART区优势准种核苷酸序列部分（5/26例）一致，部分（21/26例）不一致；肝内HBV cccDNA和血清HBV DNART区准种复杂度在核苷酸水平和氨基酸水平的差别均无统计学作用（p0.05）；肝内HBV cccDNA和血清HBV DNART区准种多样性在核苷酸水平和氨基酸水平的差别均无统计学差别（p0.05）。结论1、证实了肝内HBV cccDNA准种的有着。2.在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBV cccDNA和血清HBV DNA RT区准种数量差别无统计学作用；肝内HBV cccDNA和血清HBV DNART区优势准种不完全一致；两者准种复杂度和多样性之间差别无统计学作用。二、慢性乙型肝炎患者治疗前后肝内HBV cccDNA耐药相关位点变异的观察目的了解慢性乙型肝炎患者肝内HBV cccDNA耐药相关位点自然变异的发生情况及抗病毒治疗前后，肝内HBV cccDNA耐药相关变异位点野生型与变异型所占比例变化情况策略纳入了13例间隔约12月先后两次肝穿的慢性乙型肝炎患者，抽提冰冻肝组织获得HBV DNA抽提液，通过酶切纯化、荧光定量PCR法定量肝内HBVcccDNA和血清HBV DNA；运用PCR、巢式PCR和直接测序法检测治疗前后肝内HBVcccDNA耐药相关位点变异；对肝内HBV cccDNA的RT区克隆测序浅析。结果发现3例（3/13）有着肝内HBV cccDNA耐药相关位点自然变异；发现1例（1/13）抗病毒治疗后发生肝内HBV cccDNA耐药相关位点变异；上面陈述的4例（4/13）患者在核苷类似物抗病毒治疗后肝内HBV cccDNA耐药相关变异位点野生型与变异型所占比例发生了变化。结论1.证实了肝内HBV cccDNA有着耐药相关位点自然变异；2.在核苷类似物抗病毒治疗后肝内HBV cccDNA耐药相关变异位点野生型与变异型所占比例可能发生变化。关键词：乙型肝炎病毒论文cccDNA论文聚合酶链反应论文克隆论文准种论文肝炎病毒论文乙型论文cccDNA论文克隆论文准种论文耐药相关变异论文
摘要5-7
Abstract7-9
主要英文缩写及符号说明9-10
前言10-13