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摘要：目的：糖尿病是人类健康的严重威胁之一。糖尿病的各种并发症，尤其心血管并发症与糖尿病病人高死亡率密切相关。糖尿病心肌病（diabeticcardiomyopathy，DCM）作为一种糖尿病的早期并发症，主要体现为左心室肥厚，心室舒张功能受损，后逐渐出现心室收缩功能障碍，最终进展为充血性心力衰竭。是糖尿病患者致死的重要理由之一。DCM主要的病理转变是心肌细胞坏死、肥大及心肌间质重构及纤维化。心脏成纤维细胞增殖和细胞外基质（Extracellular Matrix，ECM）过度沉积，是导致心肌纤维化的重要环节。ECM中最主要的是胶原纤维，在心脏组织Ⅰ型胶原约占ECM的80%。有探讨表明，高血糖可诱导氧化损伤并引起ECM在心脏间质沉积，导致心室功能下降，是DCM引起心肌细胞坏死、肥大及纤维化的重要因素，在DCM的发生、进展中发挥着重要作用。内脂素（viatin，VF）作为一种较新发现的脂肪细胞因子，有类胰岛素作用，参与了炎症、免疫调节及能量代谢的历程，与肥胖、糖尿病、冠心病、代谢综合征、充血性心力衰竭等复杂性疾病密切相关。但心脏成纤维细胞的内脂素分泌及与糖尿病引起的心肌病变的联系探讨尚少。本论文通过体外模拟糖尿病患者心脏成纤维细胞外环境探讨其VF及Ⅰ型胶原的表达，阐明VF对心脏胶原沉积、间质重构及心肌纤维化可能有着的影响，以求进一步了解糖尿病心肌病的发病机制。策略：无菌试验条件下提取1～4日龄的Sprague-Dawley （SD）大鼠心脏成纤维细胞进行传代培养，取第3代心脏成纤维细胞进行实验。在进行48h含血清培养，24h无血清培养之后，选取生长状态好的细胞随机分组。实验分组分为:①对照组（NG：含5.5mmol/L葡萄糖），②高糖组10mmol/L，③高糖组30mmol/L，④高糖组50mmol/L，⑤高渗组（O：含5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇），每组设3个复孔。所有分组在干预24h后，以GAPDH为内参，运用Real time PCR和ELISA技术检测心脏成纤维细胞中VF和Ⅰ型胶原的mRNA含量和培养基中VF和Ⅰ型胶原的表达水平。结果：㈠高糖对心脏成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响与对照组比较，高糖组10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三组Ⅰ型前胶原mRNA表达均显著增加，并有统计学差别（P0.01）。与高渗透压组比较，高糖组10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三组Ⅰ型前胶原mRNA表达均有增加，且有统计学作用（P0.01）。高渗透压组Ⅰ型前胶原的基因表达与对照组比较没有统计学差别（P0.05）。高糖组30mmol/L较高糖组10mmol/LⅠ型前胶原mRNA表达增加，且有统计学差别（P0.01）。高糖组50mmol/L较高糖组30mmol/LⅠ型前胶原mRNA表达减少，但无统计学差别（P0.05）。同时用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养基中Ⅰ型胶原产物的含量表明：与对照组比较，高糖组10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三组Ⅰ型胶原表达均显著增加，并有统计学作用（P0.01）。与高渗透压组比较，高糖组10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三组Ⅰ型胶原表达均增加且有统计学差别（P0.01）。高渗透压组Ⅰ型胶原的表达与对照组比较没有统计学差别（P0.05）。高糖30mmol/L组较10mmol/L组Ⅰ型胶原表达增加，且有统计学差别（P0.01）。50mmol/L组较30mmol/L组Ⅰ型胶原表达增加，但无统计学差别（P0.05）。㈡高糖对心脏成纤维细胞VF表达的影响高糖组30mmol/L，50mmol/L组VFmRNA表达与对照组比较均增加且有统计学差别（P0.01）；高糖10mmol/L组较对照组增加,也具有统计学作用（P0.05）。高糖组30mmol/L，50mmol/L组VFmRNA表达与高渗透压组比较均增加且有统计学差别（P0.01）；高糖10mmol/L组较高渗透压组VFmRNA表达增加但无统计学作用（P0.05）。高渗透压组VF的基因表达与对照组比较没有统计学差别（P0.05）。高糖组30mmol/L较高糖组10mmol/LVFmRNA表达增加，且有统计学差别（P0.01）。高糖组50mmol/L较高糖组30mmol/LVFmRNA表达减少，但无统计学差别（P0.05）。运用用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养基中VF含量：与对照组比较，高糖组10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三组VF均有所增加，且有统计学作用（P0.01）。与高渗透压组比较，高糖组10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三组VF均有所增加，且均有统计学差别（P0.01）。高渗透压组VF的表达与对照组比较没有统计学差别（P0.05）。高糖组30mmol/L较高糖组10mmol/LVF表达增加，且有统计学差别（P0.01）。高糖组50mmol/L较高糖组30mmol/LVF表达稍减少，但无统计学差别（P0.05）。结论：高糖可推动心脏成纤维细胞VF和Ⅰ型胶原的表达增加，并呈一定的浓度依赖性。关键词：糖尿病性心肌病论文心肌纤维化论文内脂素论文Ⅰ型胶原论文心脏成纤维细胞论文Real论文time论文PCR论文ELISA技术论文
目录3-4
摘要4-7
ABSTRACT7-11
前言11-12
材料与策略12-18
结果18-21
附图21
附表21-23
讨论23-26
结论26-27