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1672－3783(2012)07－0296－01
胸腹水在临床常见，它可由多种疾病产生，而胸腹水检查在病因诊断中具有重要意义。传统检测手段包括一般性状、生化、细胞及细菌检查。随着分子生物学的迅猛发展，目前肿瘤标志物、细胞因子、DNA倍体等检测也逐渐步入临床，各种方法的联合应用大大提高了鉴别诊断率。但目前的检测大多局限于对渗出液与漏出液、良恶性胸腹水的鉴别，而针对一些病因的鉴别则缺乏特异性指标。研究表明，不同的疾病所激发的机体免疫反应是有差异的。本研究从免疫学角度出发，采用流式细胞仪对几种不同病因胸腹水中淋巴细胞亚群进行检测，探讨其在胸腹水鉴别诊断中的价值，以期寻找其分布特点，提高此类诊断的特异度及敏感度。
淋巴细胞是具有特异免疫识别功能的细胞系，人和哺乳动物的淋巴细胞系是由形态相似，功能各异的不均一细胞群所组成。按其个体发生、表面分子和功能的不同，可将淋巴细胞分为B细胞和T细胞两个亚群（subpopulation），每个亚群又可分为不同的亚类(subset)。另外还有一群单个核细胞，其来源可能与淋巴细胞相关，但不具有特异识别功能，称为天然杀伤细胞（Natural Killer cell），它是第三群淋巴细胞。
T淋巴细胞(Total T lymphocyte)（CD3+CD19－），按其功能又可分为辅助性/诱导性T淋巴细胞（T helper/inducer cell，Th/i 细胞）（CD3+CD4+CD8-）：CD4+T细胞能促进B细
抑制性/细胞毒性T淋巴细胞（T supressor/cytotoxic，Ts/c细胞）（CD3+CD4-CD8+）：TC细胞是MHC-I类分子限制性细胞，它主要识别存在于靶细胞表面上的I类分子与抗原肽片段结合的复合分子，如被病毒感染的靶细胞或癌细胞等，因此，TC效应细胞与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫以及对移植物的排斥反应有关。TS细胞它的功能是抑制免疫应答的活化期，TS细胞的抑制作用是通过它所分泌的T细胞抑制因子（T suppressor factor，T）介导的，其作用的靶细胞是抗原特异的TH及（或）B细胞。
B淋巴细胞(Total B lymphocyte)（CD3-CD19+）：B细胞是体内唯一能产生抗体免疫球蛋白分子的细胞，体内含有抗原特异性不同的抗体分子，其多样性来自千百万种不同的B细胞克隆。外周血中，B细胞约占淋巴细胞总数的10%～15%。
NK淋巴细胞(Natural Killer cell)（CD3-CD16+56+）：NK细胞杀伤靶细胞需要两者的直接接触，杀伤后NK细胞可自靶细胞解离，并可再次杀伤另一靶细胞。其杀伤机制可能是由其胞质颗粒释放细胞毒性因子有关，可包括淋巴毒素、肿瘤坏死因子、天然杀伤细胞因子（NKCF）以及穿孔素等细胞毒因子。NK细胞对机体免疫监视可发挥重要作用。NK细胞的活性受一些体液因子的调节，如干扰素和IL-2可明显增强NK细胞的杀伤活性，而雌激素及糖皮质激素则有明显的抑制作用。
胸腔积液是在病理状态下由于胸膜壁层毛细血管体液渗出与胸膜脏层毛细血管和淋巴管的再吸收之间的动态平衡失调而产生。为比较不同病因引致胸腔积液患者的T淋巴细胞亚群分布水平及对原发病的诊断价值，选择肿瘤性、结核性、其它病因等胸腔积液患者的胸水和外周血液进行T淋巴细胞亚群检测。
淋巴细胞是机体最复杂的细胞系，尤其是T淋巴细胞又分为若干亚群。淋巴细胞数量或功能异常，均可引致机体的免疫功能紊乱或缺陷。有研究报告采用流式细胞术对不同病因胸腔积液患者的胸水和外周血进行T淋巴细胞亚群检测结果表明，CD3+、CD8+细胞百分率明显高于健康人，CD4+细胞无明显差异，CD4+/CD8+比值明显低于健康人。提示CD4+/CD8+比值降低是由于CD8+细胞增高所导致，反映了胸腔积液患者的细胞免疫功能处于抑制状态。有实验检测T淋巴细胞亚群结果后显示，同一类型胸腔积液和外周血的CD3+、CD4+、CD8+细胞分布水平非常接近，说明已获得免疫调节功能的T淋巴细胞释放到外周血和分配到胸膜腔的水平有关，提示通过外周血T淋巴细胞亚亚群的检测可反映出胸水T淋巴细胞水平。而恶性胸液中CD3+、CD4+细胞值明显低于外周血。肿瘤性与结核性胸腔积液患者的T淋巴细胞亚群，无论是胸水或外周血，其CD3+、CD4+细胞值相仿，而CD8+细胞肿瘤性略低于结核性。而有的文献报告结核性胸液中CD3+、CD4+、CD8+细胞值明显高于外周血；结核性胸水中CD3+、CD4+T淋巴细胞群体均高于肿瘤性胸水。在胸腔积液患者的胸水和外周血中，均出现CD4+、CD8+双标记细胞现象。邓氏等报告，此种细胞能表现出很强的抑制功能。对此细胞检测和深入探讨，将为指导临床诊治提供有价值依据。
CD4+主要介导细胞和体液免疫，CD8+则参与抗病毒、抗肿瘤、移植排斥反应及对非己抗原诱发的免疫应答的抑制，免疫功能的改变往往敏感地表现在CD4+/CD8+比值改变上。CD4+/CD8+比值的下降被认为是疾病严重和预后不良的重要指标之一。腹水在临床上以肝硬化、结核性腹膜炎和癌性腹水最为常见，这3种病因所激发的机体免疫功能变化是不同的。有研究采用流式细胞仪对腹水T淋巴细胞亚群进行测定，发现肝硬化腹水CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+较前两种腹水显著低下，且CD4+/CD8+明显倒置。3种腹水中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以结核性腹膜炎腹水最高，癌性腹水居中；而CD8+则以癌性腹水最高，结核性腹膜炎腹水次之。腹水T淋巴细胞亚群反映了腹腔局部的免疫功能。某些研究提示：(1)肝硬化患者腹腔局部的免疫功能明显低下，这可能是患者易并发自发性腹膜炎的一个原因。(2)结核性腹膜炎患者腹膜腔局部免疫力增强，这种差异可能是基于这样的免疫和病理过程：当结核杆菌感染时，首先致敏T细胞，当机体再次受到结核杆菌感染时，首先致敏T细胞，当机体再次受到结核杆菌或抗原物质入侵时与致敏的T细胞互相作用，释放出一系列细胞因子(IL-1、TNF等)及黏附分子(P选择素等)，使得淋巴细胞、单核细胞定向腹膜腔内募集，聚集于结核杆菌或抗原所在部位周围，在病理形态学上则是我们常见的淋巴细胞和单核细胞浸润。(3)癌性腹水中的CD8+增高，多篇文献报道一致。机体对肿瘤细胞的免疫监控过程中，抗原提呈细胞将肿瘤抗原有效地提呈给T淋巴细胞，激活肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是抗肿瘤免疫的关键环节。CD8+增高致CD4+/CD8+降低，降低了患者局部对肿瘤的免疫力，可导致肿瘤细胞不断增殖与扩散。这是因为恶性肿瘤细胞能分泌免疫抑制因子，从而影响T淋巴细胞亚群的平衡状态，抑制免疫细胞的抗肿瘤免疫应答，肿瘤细胞则逃避了免疫监视。因此，解除肿瘤细胞的免疫抑制作用，优化机体的特异性抗肿瘤免疫的微环境，提高患者机体自身的抗肿瘤免疫应答，是治疗恶性肿瘤的一个有效方法。T淋巴细胞亚群从免疫学角度反映了不同病因腹水的异常，而流式细胞仪检测又相当准确、快捷。本研究提示T淋巴细胞亚群在结核性腹膜炎、肝硬化及癌性腹水存在明显差异，表明腹水T淋巴细胞亚群检测可用于腹水的鉴别诊断。机体抗结核免疫力主要是T淋巴细胞介导的巨噬细胞免疫反应。最初入侵的结核菌如在巨噬细胞内得以繁殖、生长，其抗原经溶酶体的处理或因巨噬细胞死亡而释出，呈递给辅助性T淋巴细胞(CD4)表面特殊的roT淋巴细胞受体，使之致敏，并增殖形成单克隆细胞系。刘氏实验结果表明，肺结核患者外周血T淋巴细胞CD4/CD8明显降低，进展期与稳定期、好转期相比变化更明显，说明T淋巴细胞亚群变化与病情有关。发现结核性胸水中淋巴细胞比例、CD4T淋巴细胞显著升高，此现象可能与结核病患者外周血、胸水中T淋巴细胞细胞因子(IL-1、TNF)、粘附分子(P-选择素)表达增加，从而定向肺内募集有关。与癌性胸水相比，结核性胸水中CD4T淋巴细胞亚群明显升高，这可能有助于良、恶性胸水的鉴别。
参考文献
［1］ Chi TH,WanM,Zha
［2］ Messaoudi I, Guevara Patino JA, Dyall R, et al. Direct link between mhcpolymorphi, T cell idity, and diversity in immune defense［J］ Science,2002, 298:1797～1800.
［3］ Chi TH, Wan M, Zhao K, et al. Reciprocal regulation of CD4/CD8expres-sion by SWI/SNF-like BAF complexes［J］ Nature, 2002, 418:195～199.
［4］ Gambon-Deza F, Pacheco CarracedoM, Cerda Mota T, et al. Lymphocytepopulations during tuberculosis infection: V beta repertoires［J］. Infect Im-mun, 1995, 63:1235～1240.
［5］ Tsao TC, Tsao KC, Lin MC, et al. Increased absolute number but not pro-portion of gamma/delta T-lymphocytes in the bronchoalveolar lage fluid of patients with active pulmonary tuberculosis［J］. Tuber Lung Dis, 1999, 79:215～220.
［6］ Melichar B,Touskova M,Tosner J,et al.Lymphocytes in patients with ovari-an carcinoma and other primarie［J］.Onkologie,2001,24(2):156.
［7］ Ludviksson BR,Seegers D,Resnick AS,et al.The effect of TGF-betal on immune responses of naive versus memory CD 4+Th 1/Th 2 T cells［J］Eur J Immunol, 2000,30(7):2101.
［8］ Santori FR,Arsov I,Vukmanovic S.Modulation of CD 8+T cell response to antigen by the levels of self MHC class I［J］.J Immunol,2001,166(9):5416.
［9］ Straten P,GuldbergP,Schrama D,et al.In situ cytokine therapy:redistribu-tion of clonally expanded T cells［J］Eur J Immunol,2001,31(1):250.
［10］ Qian SB,Li Y,Qian GX,et al.Efficienttumor regression induced bygeneti-cally engineered tumor cells secreting interleukin-2 and membrane-express-ing allogeneic MHC class I antigen［J］J Cancer Res Clin Oncol,2001,127(1):27.\
胸腹水在临床常见，它可由多种疾病产生，而胸腹水检查在病因诊断中具有重要意义。传统检测手段包括一般性状、生化、细胞及细菌检查。随着分子生物学的迅猛发展，目前肿瘤标志物、细胞因子、DNA倍体等检测也逐渐步入临床，各种方法的联合应用大大提高了鉴别诊断率。但目前的检测大多局限于对渗出液与漏出液、良恶性胸腹水的鉴别，而针对一些病因的鉴别则缺乏特异性指标。研究表明，不同的疾病所激发的机体免疫反应是有差异的。本研究从免疫学角度出发，采用流式细胞仪对几种不同病因胸腹水中淋巴细胞亚群进行检测，探讨其在胸腹水鉴别诊断中的价值，以期寻找其分布特点，提高此类诊断的特异度及敏感度。
淋巴细胞是具有特异免疫识别功能的细胞系，人和哺乳动物的淋巴细胞系是由形态相似，功能各异的不均一细胞群所组成。按其个体发生、表面分子和功能的不同，可将淋巴细胞分为B细胞和T细胞两个亚群（subpopulation），每个亚群又可分为不同的亚类(subset)。另外还有一群单个核细胞，其来源可能与淋巴细胞相关，但不具有特异识别功能，称为天然杀伤细胞（Natural Killer cell），它是第三群淋巴细胞。
T淋巴细胞(Total T lymphocyte)（CD3+CD19－），按其功能又可分为辅助性/诱导性T淋巴细胞（T helper/inducer cell，Th/i 细胞）（CD3+CD4+CD8-）：CD4+T细胞能促进B细
摘自：毕业论文评语www.udooo.com
胞、T细胞和其他免疫活性细胞的增生、分化，协调免疫细胞间的相互作用。T细胞在静止期不产生细胞因子，活化后才产生。抑制性/细胞毒性T淋巴细胞（T supressor/cytotoxic，Ts/c细胞）（CD3+CD4-CD8+）：TC细胞是MHC-I类分子限制性细胞，它主要识别存在于靶细胞表面上的I类分子与抗原肽片段结合的复合分子，如被病毒感染的靶细胞或癌细胞等，因此，TC效应细胞与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫以及对移植物的排斥反应有关。TS细胞它的功能是抑制免疫应答的活化期，TS细胞的抑制作用是通过它所分泌的T细胞抑制因子（T suppressor factor，T）介导的，其作用的靶细胞是抗原特异的TH及（或）B细胞。
B淋巴细胞(Total B lymphocyte)（CD3-CD19+）：B细胞是体内唯一能产生抗体免疫球蛋白分子的细胞，体内含有抗原特异性不同的抗体分子，其多样性来自千百万种不同的B细胞克隆。外周血中，B细胞约占淋巴细胞总数的10%～15%。
NK淋巴细胞(Natural Killer cell)（CD3-CD16+56+）：NK细胞杀伤靶细胞需要两者的直接接触，杀伤后NK细胞可自靶细胞解离，并可再次杀伤另一靶细胞。其杀伤机制可能是由其胞质颗粒释放细胞毒性因子有关，可包括淋巴毒素、肿瘤坏死因子、天然杀伤细胞因子（NKCF）以及穿孔素等细胞毒因子。NK细胞对机体免疫监视可发挥重要作用。NK细胞的活性受一些体液因子的调节，如干扰素和IL-2可明显增强NK细胞的杀伤活性，而雌激素及糖皮质激素则有明显的抑制作用。
胸腔积液是在病理状态下由于胸膜壁层毛细血管体液渗出与胸膜脏层毛细血管和淋巴管的再吸收之间的动态平衡失调而产生。为比较不同病因引致胸腔积液患者的T淋巴细胞亚群分布水平及对原发病的诊断价值，选择肿瘤性、结核性、其它病因等胸腔积液患者的胸水和外周血液进行T淋巴细胞亚群检测。
淋巴细胞是机体最复杂的细胞系，尤其是T淋巴细胞又分为若干亚群。淋巴细胞数量或功能异常，均可引致机体的免疫功能紊乱或缺陷。有研究报告采用流式细胞术对不同病因胸腔积液患者的胸水和外周血进行T淋巴细胞亚群检测结果表明，CD3+、CD8+细胞百分率明显高于健康人，CD4+细胞无明显差异，CD4+/CD8+比值明显低于健康人。提示CD4+/CD8+比值降低是由于CD8+细胞增高所导致，反映了胸腔积液患者的细胞免疫功能处于抑制状态。有实验检测T淋巴细胞亚群结果后显示，同一类型胸腔积液和外周血的CD3+、CD4+、CD8+细胞分布水平非常接近，说明已获得免疫调节功能的T淋巴细胞释放到外周血和分配到胸膜腔的水平有关，提示通过外周血T淋巴细胞亚亚群的检测可反映出胸水T淋巴细胞水平。而恶性胸液中CD3+、CD4+细胞值明显低于外周血。肿瘤性与结核性胸腔积液患者的T淋巴细胞亚群，无论是胸水或外周血，其CD3+、CD4+细胞值相仿，而CD8+细胞肿瘤性略低于结核性。而有的文献报告结核性胸液中CD3+、CD4+、CD8+细胞值明显高于外周血；结核性胸水中CD3+、CD4+T淋巴细胞群体均高于肿瘤性胸水。在胸腔积液患者的胸水和外周血中，均出现CD4+、CD8+双标记细胞现象。邓氏等报告，此种细胞能表现出很强的抑制功能。对此细胞检测和深入探讨，将为指导临床诊治提供有价值依据。
CD4+主要介导细胞和体液免疫，CD8+则参与抗病毒、抗肿瘤、移植排斥反应及对非己抗原诱发的免疫应答的抑制，免疫功能的改变往往敏感地表现在CD4+/CD8+比值改变上。CD4+/CD8+比值的下降被认为是疾病严重和预后不良的重要指标之一。腹水在临床上以肝硬化、结核性腹膜炎和癌性腹水最为常见，这3种病因所激发的机体免疫功能变化是不同的。有研究采用流式细胞仪对腹水T淋巴细胞亚群进行测定，发现肝硬化腹水CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+较前两种腹水显著低下，且CD4+/CD8+明显倒置。3种腹水中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以结核性腹膜炎腹水最高，癌性腹水居中；而CD8+则以癌性腹水最高，结核性腹膜炎腹水次之。腹水T淋巴细胞亚群反映了腹腔局部的免疫功能。某些研究提示：(1)肝硬化患者腹腔局部的免疫功能明显低下，这可能是患者易并发自发性腹膜炎的一个原因。(2)结核性腹膜炎患者腹膜腔局部免疫力增强，这种差异可能是基于这样的免疫和病理过程：当结核杆菌感染时，首先致敏T细胞，当机体再次受到结核杆菌感染时，首先致敏T细胞，当机体再次受到结核杆菌或抗原物质入侵时与致敏的T细胞互相作用，释放出一系列细胞因子(IL-1、TNF等)及黏附分子(P选择素等)，使得淋巴细胞、单核细胞定向腹膜腔内募集，聚集于结核杆菌或抗原所在部位周围，在病理形态学上则是我们常见的淋巴细胞和单核细胞浸润。(3)癌性腹水中的CD8+增高，多篇文献报道一致。机体对肿瘤细胞的免疫监控过程中，抗原提呈细胞将肿瘤抗原有效地提呈给T淋巴细胞，激活肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是抗肿瘤免疫的关键环节。CD8+增高致CD4+/CD8+降低，降低了患者局部对肿瘤的免疫力，可导致肿瘤细胞不断增殖与扩散。这是因为恶性肿瘤细胞能分泌免疫抑制因子，从而影响T淋巴细胞亚群的平衡状态，抑制免疫细胞的抗肿瘤免疫应答，肿瘤细胞则逃避了免疫监视。因此，解除肿瘤细胞的免疫抑制作用，优化机体的特异性抗肿瘤免疫的微环境，提高患者机体自身的抗肿瘤免疫应答，是治疗恶性肿瘤的一个有效方法。T淋巴细胞亚群从免疫学角度反映了不同病因腹水的异常，而流式细胞仪检测又相当准确、快捷。本研究提示T淋巴细胞亚群在结核性腹膜炎、肝硬化及癌性腹水存在明显差异，表明腹水T淋巴细胞亚群检测可用于腹水的鉴别诊断。机体抗结核免疫力主要是T淋巴细胞介导的巨噬细胞免疫反应。最初入侵的结核菌如在巨噬细胞内得以繁殖、生长，其抗原经溶酶体的处理或因巨噬细胞死亡而释出，呈递给辅助性T淋巴细胞(CD4)表面特殊的roT淋巴细胞受体，使之致敏，并增殖形成单克隆细胞系。刘氏实验结果表明，肺结核患者外周血T淋巴细胞CD4/CD8明显降低，进展期与稳定期、好转期相比变化更明显，说明T淋巴细胞亚群变化与病情有关。发现结核性胸水中淋巴细胞比例、CD4T淋巴细胞显著升高，此现象可能与结核病患者外周血、胸水中T淋巴细胞细胞因子(IL-1、TNF)、粘附分子(P-选择素)表达增加，从而定向肺内募集有关。与癌性胸水相比，结核性胸水中CD4T淋巴细胞亚群明显升高，这可能有助于良、恶性胸水的鉴别。
参考文献
［1］ Chi TH,WanM,Zha
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o K,et al.Reciprocal regulation of CD 4/CD 8 expres-sion by SWI/SNF-like BAF complexes.Nature,2002,418(6894):195.［2］ Messaoudi I, Guevara Patino JA, Dyall R, et al. Direct link between mhcpolymorphi, T cell idity, and diversity in immune defense［J］ Science,2002, 298:1797～1800.
［3］ Chi TH, Wan M, Zhao K, et al. Reciprocal regulation of CD4/CD8expres-sion by SWI/SNF-like BAF complexes［J］ Nature, 2002, 418:195～199.
［4］ Gambon-Deza F, Pacheco CarracedoM, Cerda Mota T, et al. Lymphocytepopulations during tuberculosis infection: V beta repertoires［J］. Infect Im-mun, 1995, 63:1235～1240.
［5］ Tsao TC, Tsao KC, Lin MC, et al. Increased absolute number but not pro-portion of gamma/delta T-lymphocytes in the bronchoalveolar lage fluid of patients with active pulmonary tuberculosis［J］. Tuber Lung Dis, 1999, 79:215～220.
［6］ Melichar B,Touskova M,Tosner J,et al.Lymphocytes in patients with ovari-an carcinoma and other primarie［J］.Onkologie,2001,24(2):156.
［7］ Ludviksson BR,Seegers D,Resnick AS,et al.The effect of TGF-betal on immune responses of naive versus memory CD 4+Th 1/Th 2 T cells［J］Eur J Immunol, 2000,30(7):2101.
［8］ Santori FR,Arsov I,Vukmanovic S.Modulation of CD 8+T cell response to antigen by the levels of self MHC class I［J］.J Immunol,2001,166(9):5416.
［9］ Straten P,GuldbergP,Schrama D,et al.In situ cytokine therapy:redistribu-tion of clonally expanded T cells［J］Eur J Immunol,2001,31(1):250.
［10］ Qian SB,Li Y,Qian GX,et al.Efficienttumor regression induced bygeneti-cally engineered tumor cells secreting interleukin-2 and membrane-express-ing allogeneic MHC class I antigen［J］J Cancer Res Clin Oncol,2001,127(1):27.\