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摘要：[背景与目的]葛根是南京中医药大学第一附属医院血液科于1989年根据解毒活血法独创复方中药制剂“血复康”的组要成分之一。临床上用于治疗急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)及慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)已愈十年,疗效确切。近年来课题组探讨发现,葛根主要活性成分葛根总黄酮(Puerariae radix flones, PRF)在50μg/ml-200μg/ml的浓度范围内对NB4、Kasumi-1、HL-60、U937四种急性髓系白血病细胞株有选择性增殖抑制作用。本实验以急性单核细胞白血病细胞株SHI-1细胞株为探讨对象,进一步探讨PRF体外对SHI-1细胞的效应,并初步探讨可能的作用机制。[策略]以SHI-1细胞(MLL-AF6融合基因阳性,伴有P53表达异常；AML-M5b细胞株)为探讨对象1)0-200μg/ml PRF处理SHI-1细胞24.、48及72小时,MTT法检测SHI-1细胞增殖抑制率,筛选PRF最佳工作浓度。2)0、50、100、150μg/mlPRF处理SHI-1细胞48小时,瑞吉氏染色观察细胞形态学转变；流式细胞术FITC-Annexinv/PI双染法检测细胞早期凋亡率；流式细胞术检测细胞周期进程。3)0、50、100、150μg/ml PRF处理SHI-1细胞48小时,RT-PCR检测MLL-AF6融合基因的转变。[结果]MTT法检测显示PRF在0-200μg/ml浓度范围内对SHI-1细胞有增殖抑制作用,有显著的时效-量效联系,48h IC50值为136.87μg/ml。0、50、100、150μg/mlPRF处理SHI-1细胞48h,瑞吉氏染色光镜下观察到细胞形态出现典型的凋亡特点；FITC-Annexinv/PI检测细胞早期凋亡率发现随药物浓度的增加,细胞凋亡率也显著升高；流式细胞术检测细胞周期发现随着PRF浓度的增加,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,阻止细胞周期进程于S期；RT-PCR显示：随着PRF浓度的增加,MLL-AF6融合基因无显著变化。[结论]200μg/ml以下浓度PRF体外能抑制SHI-1细胞增殖,具有时效-量效联系；150μg/ml以下浓度PRF能够诱导SHI-1细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期;150μg/ml以下浓度PRF虽能有效诱导SHI-1细胞凋亡,但并不能在mRNA水平下调MLL-AF6致病融合基因的表达。关键词：葛根总黄酮论文SHI-1细胞论文细胞凋亡论文MLL-AF6论文
目录5-6
摘要6-7
Abstract7-8
绪论8-9
第一部分：论述探讨9-19
一.急性白血病的中医病因病机及辨证论治9-10
1. 中医对急性白血病的认识9
2. 中医对急性白血病病因病机的阐述9
3. 急性白血病的中医辨证论治9-10
二.急性白血病的西医诊断及治疗进展10-16
1. 病因及发病机制10-11
2. 急性髓系白血病的分型11-12
3. 急性髓系白血病的危险分层和预后因素12-13
4. 急性白血病的治疗进展13-16
三.葛根古今临床运用探讨16-19
1. 葛根中医临证运用概述17
2. 葛根的现代药理探讨进展17-19
第二部分：葛根总黄酮诱导SHI-1细胞凋亡及其机制的实验探讨19-31
一.材料与策略19-25
1. 材料19-20
2. 策略20-25
二.实验结果25-30
三.结论30-31
讨论31-33