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摘要：目的探讨PDGFR-α受体反义寡核苷酸对体外视网膜色素上皮(Retinal pigment epithepum, RPE)细胞的增殖和凋亡的作用,为PDGFR-α受体反义寡核苷酸用于防治增生性玻璃体视网膜病变实验依据。方法1.体外培养人视网膜色素上皮细胞株HRPE,使用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000将不同质量浓度(0、1.0、2.0μmol/L)靶向血小板源性生长因子α受体(PDGFR-α)基因的ASODN转染至细胞株RPE细胞,倒置显微镜下观察RPE细胞的形态学改变。2.将不同质量浓度(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用RPE细胞24、48、72h后,应用MTT法间接检测细胞增殖的变化,并计算抑制率。3.(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用RPE细胞48h后,Hoechst33258染色观察凋亡细胞;流式细胞仪检测PDGFR-αASODN对RPE细胞周期的影响。4.RT-PCR检测不同质量浓度(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用的RPE细胞后PDGFR-αmRNA表达的变化。结果1. PDGFR-αASODN处理RPE细胞后,细胞分裂相变少,细胞变圆,浓度的增加,细胞出现漂浮及坏死的现象。PDGFR-αASODN能抑制RPE的增殖,作用时间的延长和浓度的增加抑制作用越,表现为浓度与时间依赖性(P0.01)。2. PDGFR-αASODN能诱导细胞的凋亡,(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN处理RPE细胞48h后,凋亡率分别为:(10.9±1.7)%、(38.5±1.4)%、(61.6±2.3)%。与对照组比较,各实验组凋亡率增加(P0.01),各实验组两两比较差异(P0.01)。3.流式细胞术:(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN作用RPE细胞后,停滞在G_1期细胞百分率分别为:(34.8±1.4)%、(56.3±2.3)%、(64.4±3.2)%。与对照组比较,各实验组G_1细胞百分率增加(P0.01),各实验组两两比较差异(P0.01),呈浓度依赖性。4. (0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN处理RPE细胞48h后,PDGFR-αmRNA的表达呈下降趋势。1. PDGFR-αASODN能抑制RPE细胞的增殖,并表现为浓度和时间依赖性;PDGFR-αASODN能诱导RPE细胞的凋亡,将细胞阻滞于G_1期,呈现为浓度依赖性。2. PDGFR-αASODN可能下调PDGFR-αmRNA的表达来发挥其防治PVR的作用并有可能治疗PVR的潜在靶点。关键词：PDGF-α受体论文反义寡核苷酸论文视网膜色素上皮细胞论文增殖论文凋亡论文增殖性玻璃体视网膜病变论文
中文摘要4-6
ABSTRACT6-9
符号9-10
前言10-13
1 和方法13-23
1.1 13-14
1.2 方法14-23
2 结果23-29
2.1 PDGFR-αASODN 处理后细胞生长的观察23-24
2.2 PDGFR-αASODN 对 RPE 细胞增殖的抑制作用24-25
2.3 PDGFR-αASODN 诱导细胞凋亡25
2.4 PDGFR-αASODN 对细胞周期及凋亡率的影响25-28
2.5 PDGFR-αASODN 对 PDGFR-αmRNA 表达的影响28-29
3 讨论29-32
4 32-33