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低盐榨菜自然发酵微生物群落动态变化和功能

收藏本文 2024-01-28 点赞:9567 浏览:35072 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:PCR-SSCP方法,分析低盐榨菜腌制中微生物群落结构,对SSCP图谱中11条优势条带了切胶回收、克隆测序,序列比对结果,榨菜发酵初期,肠膜明串珠菌为主要的优势菌群;腌制环境条件的变化,出现了植物乳杆菌和短乳杆菌;在腌制保存后期起主导作用的微生物为植物乳杆菌和Lactobacillus veroldensis。总DNA提取改进的SDS高盐提取法,微生物多样性较高;洗脱液(0.5 M醋酸铵;10 mM醋酸镁;1 mM乙二胺四乙酸,pH 8.0; 0.1%十二烷基硫酸钠)琼脂糖凝胶回收试剂盒回收PAGE胶目的DN段,简便且回收效率高。为了研究优势乳酸菌在榨菜腌制中的功能,传统的分离培养方法从低盐腌制榨菜中分离到三株乳酸菌L32、L33、L34,经过简单的生理生化试验,发现三株菌均为革兰氏染色阳性、无芽孢、接触酶阴性菌株;乳酸纸层析试验结果,三株菌均能产生乳酸,属于乳酸菌;葡萄糖产酸产气试验结果,L32、L34为同型发酵乳酸菌,L33为异型发酵乳酸菌;三株菌16S rRNA序列比对结果,L32为弯曲乳杆菌,L33为嗜柠檬酸明串珠菌,L34为植物乳杆菌,与SSCP方法的优势乳酸菌基本一致。三株菌的最适生长温度均为30℃,最适生长pH均为6.5,培养6 h即稳定期,在0-8%的盐度下均能生长。研究了榨菜低盐腌制工艺的品质特性变化,榨菜腌制中pH值始终呈下降趋势,由初始pH 6.0开始下降,稳定在pH 3.7左右;乳酸菌数量了一个先急速上升,在第10天达到峰值3×10~8 cfu/mL后逐渐减少,稳定在1×10~8 cfu/mL左右的;亚硝酸盐含量也呈现出先急速上升,在第3天达到峰值8.39 mg/kg后下降,之后趋于平缓,稳定在1 mg/kg左右。L32、L33、L34三株乳酸菌发酵上清液对大肠杆菌、金葡萄球菌和枯草芽孢杆菌都表现出良好的抑菌效果。将MRS液体培养基pH调至各乳酸菌发酵液终点pH,抑菌圈直径较原发酵液只下降30%左右,在发酵液中最主要的抑菌物质是乳酸;将各乳酸菌发酵上清液经过氧化氢酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,抑菌圈直径都有不同的下降,除乳酸外,发酵液中还含有过氧化氢、细菌素等抑菌物质。综上所述,乳酸菌是榨菜自然发酵中主要的优势菌群,对于榨菜发酵及其品质特性变化起着较的作用,主要表现在:乳酸菌发酵产酸,降低制品pH值;减少制品中亚硝酸盐含量;对有害微生物及某些杂菌的抑制作用。关键词:榨菜论文16S论文rRNA论文乳酸菌论文SSCP论文

    摘要5-7

    Abstract7-13

    引言13-14

    1 绪论14-26

    1.1 腌制蔬菜发展现状14-15

    1.1.1 腌制蔬菜简介14

    1.1.2 问题与现状14-15

    1.1.3 发展趋势15

    1.2 榨菜研究进展15-16

    1.2.1 榨菜简介15

    1.2.2 研究概况15-16

    1.3 传统方法研究榨菜中的微生物16-18

    1.3.1 研究概况16

    1.3.2 榨菜中的乳酸菌16-17

    1.3.3 问题与现状17-18

    1.4 分子生物学方法研究榨菜中的微生物18-22

    1.4.1 SSCP 方法简介18

    1.4.2 研究概况18

    1.4.3 其他分子生物学技术18-22

    1.5 腌制榨菜中乳酸菌的功能22-24

    1.5.1 乳酸菌简介22

    1.5.2 乳酸菌发酵榨菜机理22-23

    1.5.3 乳酸菌的抑菌特性23

    1.5.4 腌制蔬菜中的亚硝酸盐23-24

    1.6 立题的背景与研究目的24-26

    1.6.1 立题背景24

    1.6.2 研究目的24-26

    2 SSCP 法分析榨菜腌制中微生物群落结构26-42

    2.1 与方法26-33

    2.1.1 原料26

    2.1.2 主要及试剂26-28

    2.1.3 主要仪器设备28

    2.1.4 SSCP 分析28-32

    2.1.5 回收条带的克隆32-33

    2.2 结果与分析33-39

    2.2.1 基因组DNA 提取结果33-34

    2.2.2 PCR 扩增结果34

    2.2.3 SSCP 结果34-35

    2.2.4 测序结果35-38

    2.2.5 群落中微生物的功能分析38-39

    2.3 讨论39-41

    2.3.1 DNA 提取方法39

    2.3.2 PCR 反应条件39

    2.3.3 酶切方法39-40

    2.3.4 银染方法40

    2.3.5 PAGE 胶回收方法40-41

    2.4 小节41-42

    3 乳酸菌的分离鉴定及其生物学基本特性分析42-57

    3.1 与方法42-46

    3.1.1 原料42

    3.1.2 主要及试剂42-43

    3.1.3 主要仪器设备43

    3.1.4 低盐榨菜的腌制43

    3.1.5 乳酸菌的分离、纯化及保存43

    3.1.6 乳酸菌初步鉴定43-44

    3.1.7 乳酸菌的分子鉴定44-46

    3.2 结果与分析46-56

    3.2.1 乳酸菌的初步鉴定46-49

    3.2.2 乳酸菌的分子鉴定49-53

    3.2.3 乳酸菌的生长特性53-56

    3.3 讨论56

    3.4 小节56-57

    4 乳酸菌在榨菜腌制中的作用57-66

    4.1 与方法58-60

    4.1.1 原料58

    4.1.2 主要及试剂58

    4.1.3 主要仪器设备58

    4.1.4 乳酸菌数量的测定58

    4.1.5 pH 测定58-59

    4.1.6 亚硝酸盐含量的测定59-60

    4.1.7 乳酸菌抑菌特性的研究60

    4.2 结果与分析60-64

    4.2.1 乳酸菌计数及pH 变化分析60-61

    4.2.2 亚硝酸盐含量测定结果61-62

    4.2.3 乳酸菌抑菌试验结果62-64

    4.3 讨论64

    4.4 小节64-66

    5 和建议66-68

    5.1 实验66

    5.2 存在的问题与不足66-67

    5.3 研究的建议67-68

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