本站原创摘要8-9
ABSTRACT9-10
1.前言10-18
1.1 极端生物10
1.2 嗜热微生物和高温酶10-11
1.3 未培养技术11-12
1.3.1 未培养微生物资源介绍11
1.3.2 纯培养技术与未培养技术11-12
1.3.3 环境宏基因组学12
1.4 碱性蛋白酶介绍12-13
1.4.1 碱性蛋白酶的背景和现状12-13
1.4.2 碱性蛋白酶作用机制机理介绍13
1.5 酶的定向进化介绍13-14
1.5.1 酶的定向进化介绍13-14
1.5.2 易错滚环复制技术介绍14
1.6 南极、深海生态学研究简介14-18
1.6.1 南极概况14-15
1.6.2 深海环境简介15-16
1.6.3 南极微生物学研究进展16-18
2.与方法18-35
2.1 18-24
2.2 基本方法24-27
2.3 ZS位点土壤沉积物样品微生物宏基因组Coid文库的构建及研究27-32
2.4 ZS coid DNA宏基因组文库中蛋白酶酶活筛选32
2.5 Fopn-酚法测定蛋白酶活力32-33
2.6 蛋白酶的定向进化-易错滚环扩展法33-35
3.结果与分析35-49
3.1 南极中山站排污口土样微生物宏基因组文库的构建和研究35-39
3.1.1 土壤样品中大片段DNA提取结果35
3.1.2 土壤样品中大片段目的DNA的分离筛选35-36
3.1.3 土壤样品中大片段目的DNA的回收和浓度控制36-37
3.1.4 土壤样品中大片段目的插入DNA末端补平和浓度控制37
3.1.5 ZS Coid宏基因组文库构建和评估37-39
3.2 ZS Coid宏基因组文库的蛋白酶活性基因的筛选39
3.3 蛋白酶基因的克隆和测序39
3.4 蛋白酶基因的序列分析39-43
3.5 蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达及产物纯化43-44
3.6 蛋白酶性质44-47
3.6.1 温度对酶活力及稳定性的影响44-45
3.6.2 pH值对酶活力的影响45
3.6.3 钙离子对酶热稳定性的影响45-46
3.6.4 金属离子及螯合剂对蛋白酶活力的影响46-47
3.6.5 表面活性剂对蛋白酶活力的影响47
3.7 蛋白酶的定向进化改造47-49
4.讨论49-52