简论宫颈癌TLR3与HPV16E6变异在宫颈病变中作用

摘要：目的探讨TLR3、HPV病毒负荷量在宫颈病变进展历程中的作用；探讨TLR3与HPV感染调节的联系；了解本院检测的HPV16E6基因突变在宫颈病变中的分布特点,探讨HPV16E6基因突变与宫颈病变进展的联系。策略以54例HPV16阳性患者宫颈脱落细胞标本中提取DNA作为模版,设计对应的引物,用PCR策略扩增TLR3和HPV16E6片段,对TLR3和HPV16E6进行半定量检测,HPV16E6的PCR产物被纯化回收后送测序。测序结果和GenBank中的德国标准株比对,浅析基因变异情况。x结果1.根据宫颈病变程度分为三组,其中A组(包括慢性宫颈炎14例、CIN I4例)18例、B组(包括CIN II-III12例及宫颈原位癌6例)18例及C组(包括宫颈浸润癌)18例,3组患者年龄之间差别无统计学作用。(p=0.506)。2.各组TLR3的表达：在A组、B组、C组中,TLR3DNA表达量分别为(0.6676±0.0226)、(0.6484±0.0353)和(0.5652±0.0330),其表达量逐渐减低,差别有统计学作用(p0.001)；其在A组及B组中的表达显著高于C组,差别均具有统计学作用(p0.001；p0.001)；在A组中的表达略高于B组,差别无统计学作用(p=0.066)。3.各组HPV16E6DNA表达情况：在A组、B组及C组中,HPV16E6DNA的含量分别为(0.3771±0.0266)、(0.6600±0.0401)和(0.7393±0.0271),其含量逐渐增加,差别有统计学作用(p0.001)；其在B组及C组中表达均高于A组,差别均有统计学作用(p0.001；p0.001)；在C组中表达高于B组,差别有统计学作用(p0.001)。4.在测序成功的53例样本中发现HPV16E6DNA在26例样本中(49.06%)有着4个位点突变,其余27例样本(50.94%)未发现突变,为E6野生型。在3组标本中,热突变点为T178G(D25E),这种变体与HPV16亚洲型As相同,此点突变在A组中的分布低于在B组和C组中的分布,差别均具有统计学作用(p0.05；p0.025),而在B组和C组中的分布差别无统计学作用(p0.25)。有2例宫颈癌标本发生T241G(3.77%)。另有2个单例标本点突变是G188T(L30I,1.89%)和G543A(L147R1.89%)。5.3组宫颈病变中TLR3表达水平与HPV16负荷量呈负相关,相联系数r=-0.637,p0.001。结论：1.TLR3可能在HPV感染的调节历程中发挥重要作用,其可能是机体应答HPV感染的主要免疫机制：TLR3在宫颈病变中表达的异常可能与宫颈细胞由宫颈癌前病变向宫颈癌的进展历程密切相关。2.HPV16负荷量与宫颈病变的进展密切相关,HPV16E6基因突变可能是轻度宫颈病变向重度宫颈病变进展历程中的重要危险因素。3.TLR3可能在HPV16E6表达的调节历程中发挥重要作用。关键词：宫颈癌论文HPV16论文E6论文TLR3论文基因突变论文

中文摘要4-6

Abstract6-8

目录8-10

符号说明10-11

前言11-14

探讨近况、成果11-12

探讨目的、策略12-14

材料和策略14-18

1.1 实验材料14-15

1.1.1 实验标本14

1.1.2 实验器材14

1.1.3 相关试剂及耗材14-15

1.1.4 主要液体配制15

1.2 实验策略15-18

1.2.1 全基因组DNA抽提15

1.2.2 PCR扩增目的片段15-16

1.2.3 琼脂糖凝胶电泳16

1.2.4 阳性PCR产物胶回收16-17

1.2.5 目的条带测序17

1.2.6 统计学策略17-18

结果18-27

2.1 各组间患者的年龄比较18

2.2 各组患者TLR3 DNA表达情况18-19

2.3 各组标本HPV16 E6 DNA表达情况19-21

2.4 HPV16 E6回收纯化后琼脂糖凝胶电泳21

2.5 HPV16 E6测序结果21-25

2.6 各组宫颈病变中TLR3表达水平与HPV16负荷量的相关性25-27

讨论27-34

3.1 Toll样受体327-29

3.1.1 TL3结构、定位及其配体27-28

3.1.2 TLR3信号转导通路28

3.1.3 TLR3抗病毒作用28-29

3.2 HPV16与宫颈癌的联系29-32

3.2.1 HPV16导致宫颈病变的发病机制29-30

3.2.1.1 HPV16 E6蛋白与p53蛋白29

3.2.1.2 HPV16 E6蛋白与PDZ蛋白29-30

3.2.1.3 HPV16 E6与端粒酶30

3.2.2 HPV16持续感染及病毒负荷量与宫颈病变的联系30-31

3.2.3 HPV16 E6基因变异在宫颈病变进展中的作用31-32

3.3 TLR3在宫颈HPV16感染中的作用32-34

结论34-35