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摘要：类泛素蛋白SUMOs是泛素样蛋白家族成员之一,广泛有着于真核细胞中,SUMOs在高等脊椎动物中已有大量探讨,而在无脊椎动物中探讨较少。类泛素化修饰途径(SUMOylation)是真核生物中重要的转录后修饰,在转录调控、蛋白定位以及细胞周期进程中具有重要功能。本探讨克隆得到中华绒螯蟹SUMO化相关基因EsSUMO、EsAos1/EsUba2和EsUbc9的cDNA全长序列。EsSUMO基因ORF为282bp,编码93个氨基酸；EsAosl基因ORF为1038bp,编码345个氨基酸；EsUba2基因ORF为1950bp,编码649个氨基酸；EsUbc9基因ORF为483bp,编码160个氨基酸。生物信息学浅析：EsSUMO蛋白具有保守的ΨKXE/D基序和GG重复序列；EsAos1蛋白具有Aos1-Uba2相互作用位点；EsUba2蛋白具有ATP结合位点和半胱氨酸活性位点；EsUbc9蛋白具有泛素结合酶UBC功能域和半胱氨酸活性位点。实时荧光定量PCR浅析发现,SUMO化相关基因在成体各组织中均有表达。EsSUMO和EsUbc9基因在精巢、卵巢和肌肉中表达量相对较高,在其他组织中表达量相对较低,在肠、血液和胃中表达量最低；EsAos1和EsUba2表达特点基本类似,也在精巢和卵巢中表达量相对较高。该途径相关基因在河蟹性腺中的高表达暗示着SUMO化修饰途径可能参与调控性腺发育和配子发生。此外,SUMO化相关基因在精巢发育Stage Ⅱ-2表达量均上升到最高值,而后表达量逐渐下降,在精巢发育Stage Ⅳ表达量达到最低；在卵巢发育Stage Ⅲ-2表达量均上升到最高值,而后在卵巢发育Stage Ⅳ表达量下降到最低值。这些都暗示着SUMO化修饰途径对性腺发育和配子发生历程有一定的调控作用。原位杂交技术对SUMO化修饰途径相关功能基因EsSUMO和EsUbc9在精巢和卵巢中的定位浅析发现,在精巢中,EsSUMO和EsUbc9基因转录本主要有着于精母细胞和精细胞中；在卵巢中,EsSUMO和EsUbc9基因转录本主要集中在成熟卵细胞中。精巢和卵巢中EsSUMO和EsUbc9的表达方式暗示着SUMO化修饰在精子发生和卵子发生历程中具有重要作用。关键词：中华绒螯蟹论文SUMO化论文实时定量PCR论文原位杂交论文
摘要6-7
ABSTRACT7-9
第一章文献综述9-21
第一节 类泛素蛋白SUMOs探讨概况9-12
第二节 类泛素化修饰途径(SUMOylation)的探讨作用和探讨进展12-18
第三节 本探讨的目的、作用和技术路线18-21
第二章 中华绒螯蟹类泛素化修饰途径相关基因cDNA克隆及序列浅析21-60
第一节 中华绒螯蟹类泛素基因SUMO cDNA克隆及序列浅析21-36
第二节 中华绒螯蟹类泛素活化酶E1基因(Aos1/Uba2)cDNA克隆及序列浅析36-51
第三节 中华绒螯蟹类泛素结合酶E2基因(Ubc9)cDNA克隆及序列浅析51-60
第三章 中华绒螯蟹类泛素化修饰途径相关基因在不同组织中的表达60-71
第一节 中华绒螫蟹类泛素基因SUMO cDNA在不同组织中的表达60-64
第二节 中华绒螫蟹类泛素活化酶E1基因(Aos1/Uba2)在不同组织中的表达64-68
第三节 中华绒螯蟹类泛素结合酶E2基因(Ubc9)在不同组织中的表达68-71
第四章 中华绒螯蟹类泛素化修饰途径相关基因在性腺不同发育时期的表达71-91
第一节 中华绒螯蟹类泛素基因SUMO在性腺不同发育时期的表达73-78
第二节 中华绒螯蟹类泛素活化酶E1基因(Aos1/Uba2)在性腺不同发育时期的表达78-86
第三节 中华绒螯蟹类泛素结合酶E2基因(Ubc9)在性腺不同发育时期的表达86-91
第五章 中华绒螯蟹类泛素化修饰途径相关基因在性腺中的原位杂交定位浅析91-102
第一节 中华绒螫蟹类泛素基因(SUMO)在性腺中的原位杂交定位91-99
第二节 中华绒螯蟹类泛素结合酶基因(Ubc9)在性腺中的原位杂交定位99-102
第六章 总结与展望102-104
附录104-105