摘要：绵羊肺炎支原体(Mycoplaa ovipneumoniae,MO)可以引起绵羊和山羊的增生性、间质性胸膜肺炎。在全世界有蔓延的走势,给养羊业造成了巨大的损失,所以对羊支原体病的探讨日益受到人们的重视,本试验以病原的分离鉴定、诊断策略和药物防治等方面对MO进行了探讨,为生产上防治该病提供了依据。1、通过对内蒙古四子王旗和达拉特旗的养羊场中疑似患有传染性胸膜肺炎的羊只采集肺脏和胸水共33份,对病料进行无菌剪碎、组织研磨并接种到改良Hayfpck培养基中,胸水用0.22μm滤器过滤后接种到改良Hayfpck培养基中,之后通过培养和纯化后得到12个分离物。通过染色镜检、生化鉴定和血清学鉴定,证实分离物与绵羊肺炎支原体MO标准株Y-98为同种。2、将符合MO的其中3个菌株,参照NCBI已知MO的16SrRNA的序列设计一对可扩增700bp片段的引物进行PCR扩增,结果标准株Y98和分离物D13、D27和XJ均扩增出与预期结果相符的700bp片段。将电泳亮条带凝胶回收后测序。测序结果显示所测序列与标准株Y-98的同源性分别为97.7%、98.6%和100%。该结果确定了所得分离物为MO的某一成员,证实以上两个地区羊场中导致羊传染性胸膜肺炎的主要病原体为MO。3、本实验室首次采取通过酶标仪测定MO液体培养物的OD450处吸光值的策略绘制了MO的生长曲线。通过对分离株D13、D27、XJ和标准株Y-98在改良Hayfpck培养基、改良KM2培养基、改良FM4培养基、改良Hayfpck培养基和加入添加剂(OXOID)的支原体基础培养基的生长情况绘制了生长曲线,并通过浅析和比较,结果证明改良Hayfpck培养基是培养MO的最佳培养基。4、本实验室选取了泰妙霉素、氟苯尼考、卡那霉素、洁霉素、恩诺沙星、新霉素、四环素、链霉素、红霉素、庆大霉素和罗红霉素等12中抗菌药物,对3个分离株进行了敏感药物的筛选,其中卡那霉素、泰妙霉素、新霉素、恩诺沙星、氟苯尼考和洁霉素6种为高敏感药物,此结果表明此6种高敏感药物可以作为防治内蒙古四子王旗和达拉特旗MO的首选药物。5、本实验室对分离株中生长较好的一株绵羊肺炎支原体XJ株进行了全基因组测序,并对其进行基因家族浅析,并通过基因预测和基因功能预测,对其全序列进行浅析和探讨,为以后绵羊传染性胸膜肺炎的防治和疫苗研制提供了重要的依据。关键词：绵羊肺炎支原体论文分离论文鉴定论文全基因组论文
摘要3-4
Abstract4-8
1 引言8-16
1.1 绵羊传染性胸膜肺炎的探讨进展8-11
1.1.1 绵羊肺炎支原体的特性9
1.1.2 流行病学9-10
1.1.3 MO的致病机理10
1.1.4 临床症状10
1.1.5 病理变化10-11
1.2 病料的采样和处理11
1.3 病原分离与培养11
1.4 病原的鉴定11-13
1.4.1 形态学鉴定11-12
1.4.2 生化鉴定12
1.4.3 血清学鉴定12
1.4.4 生长抑制试验12
1.4.5 PCR鉴定12-13
1.5 诊断13
1.6 防治措施13-14
1.7 免疫学探讨进展14-15
1.8 本探讨的目的和作用15-16
2 MO的分离培养与鉴定16-29
2.1 实验材料16
2.2 试验策略16-21
2.2.1 病料的采集16
2.2.2 分离与培养16-17
2.2.3 病原的鉴定17-18
2.2.4 生长抑制试验18
2.2.5 PCR鉴定18-19
2.2.6 培养基的筛选19-20
2.2.7 敏感药物的筛选20
2.2.8 保存与复苏20-21
2.3 实验结果21-28
2.3.1 临床症状与病变21-22
2.3.2 分离培养结果22-23
2.3.3 鉴定结果23-25
2.3.4 培养基筛选结果25-27
2.3.5 保存与复苏27
2.3.6 敏感药物蹄选结果27-28
2.4 讨论28-29
3 MO基因组序列的测定和浅析29-35
3.1 XJ全基因组的测定29-30
3.2 基因组组装结果评价30
3.2.1 基因组覆盖度浅析30
3.2.2 基因区覆盖度浅析30
3.3 基因预测30
3.4 ncRNA预测30-31
3.5 基因功能注释31
3.6 结果31-35
3.6.1 XJ全基因组参数31-32
3.6.2 基因组覆盖度32-33
3.6.3 基因预测结果33
3.6.4 重组序列浅析结果33-34
3.6.5 ncRNA的预测结果34-35
3.6.6 基因功能注释结果35
4 讨论35-36
5 全文结论36-37
致谢37-38
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