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摘要：目的：以IFN-γ/IL-4代表Th1/Th2平衡，通过观察不同纤维化程度CHB患者外周血Th1、Th2细胞频率，外周血单个核细胞（peripheral bloodmononuclear cells, PBMCs）中IFN-γ、IL-4mRNA表达，血清IFN-γ、IL-4水平以及肝组织IFN-γ、IL-4蛋白表达，旨在探讨Th1/Th2平衡在CHB肝纤维化发生进展中的作用。策略：收集2011年3月至2011年10月在河北医科大学第三医院感染科接受肝组织病理活检的CHB患者46例，其中男性31例，女性15例。CHB的诊断符合中华医学会感染病学分会及肝病学分会联合制定的2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准。肝纤维化病理分期依据2000年版《病毒性肝炎防治案例》的标准，其中S_(0-1)期患者15例、S_(2-3)期患者20例、S_4期患者11例。另取同期我院10例健康志愿者作为血清学健康对照，10例肝移植的供体作为组织学正常对照所有患者入院次晨取空腹静脉血，运用全自动生化浅析仪检测血清生化指标；酶免疫法检测HBV血清学标志物：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb；全自动血凝仪检测凝血指标；real-time PCR检测HBVDNA水平（检测下限为500copies/mL）。运用流式细胞术检测外周血Th1细胞频率和Th2细胞频率；real-timePCR检测PBMCs中IFN-γ、IL-4mRNA表达；双抗体夹心ELISA检测血清IFN-γ、IL-4因子水平；免疫组织化学染色检测肝组织IFN-γ、IL-4蛋白表达。用SPSS13.0统计软件对数据进行浅析。实验数据以x±s表示。多组比较采取Kruskal-Walps H检验，组间比较采取Mann-Whitney U检验。相关性浅析采取Spearman等级相关浅析。多因素浅析采取Logistic回归浅析。结果：1一般资料各组探讨对象的的年龄和性别比例具有可比性。各临床常规指标与肝纤维化分期相关性浅析显示：年龄、男性、AST、TB、DB、TBA、GGT、ALKP、PT、INR与纤维化分期呈正相关；白蛋白、CHE、PTA、PLT与纤维化分期呈负相关；ALT、HBV DNA及HBeAg状态与纤维化分期无显著相关性（分别为P=0.074; P=0.244; P=0.172）。2外周血Th1、Th2细胞频率变化情况Th1细胞频率在正常对照组、S_(0-1)组、S_(2-3)组和S_4组间无显著差别（P0.05）。Th2细胞频率在各组间有显著差别（P0.05），且随纤维化程度加重逐渐升高，其中S_(0-1)、S_(2-3)和S_4组间两两比较均有统计学差别（均P0.05），但S_(0-1)组与正常对照组相比无显著差别（P0.05）。与正常对照组相比，Th1/Th2细胞频率的比值在各纤维化组均呈不同程度下降，尤以S_(2-3)组、S_4组下降更为显著（均P0.05），而S_(0-1)组与正常对照组相比无显著差别（P0.05），同时S_(2-3)、S_4组较S_(0-1)组也显著下降（均P0.05）。BMCs中IFN-γ与IL-4mRNA表达变化情况PBMCs中IFN-γ与IL-4mRNA水平在正常对照组、S_(0-1)组、S_(2-3)组和S_4组间均有差别（均P0.05），两者的表达均随肝纤维化程度加重逐渐升高（均P0.05），其中IL-4mRNA升高走势更为显著，但两者在S_(0-1)组与正常对照组的表达均无显著差别（均P0.05）。S_(0-1)组、S_(2-3)组和S_4组CHB患者IFN-γ/IL-4mRNA比值随纤维化程度加重逐渐下降，依次为0.96±0.11、0.71±0.16、0.44±0.14，以S_4组下降最为显著，各组间两两比较差别均有统计学作用（均P0.05），但S_(0-1)组与正常对照组比较无显著差别（P0.05）。4血清IFN-γ与IL-4水平变化情况CHB患者血清IFN-γ水平与正常对照组比较呈不同程度升高（P0.05），尤以S_(2-3)组、S_4组升高更为显著（均P0.05），但S_(0-1)组与正常对照组比较无显著差别，S_(2-3)组、S_4组血清IFN-γ水平较S_(0-1)组也显著升高（均P0.05），而S_(2-3)组和S_4组比较无显著差别。CHB患者血清IL-4水平随肝纤维化程度加重逐渐升高，且各组间两两比较差别均有统计学作用（均P0.05），但S_(0-1)组与正常对照组比较无显著差别。血清IFN-γ/IL-4比值在正常对照组、S_(0-1)组、S_(2-3)组和S_4组依次降低，分别为2.05±0.10、2.13±0.28、2.09±0.62、0.80±0.08，S_4组的IFN-γ/IL-4比值显著低于S_(0-1)组和S_(2-3)组（均P0.05），而后两者比较无统计学差别，且S_(0-1)组、S_(2-3)组与正常对照组比较也均无统计学差别。CHB患者血清IFN-γ/IL-4比值与肝纤维分期呈负相关（r=–0.616, P0.01）。5肝组织IFN-γ与IL-4表达比值变化情况CHB患者肝内IFN-γ表达较正常对照组显著升高（P0.05），其中S_4组患者肝内IFN-γ的表达显著低于S_(0-1)组和S_(2-3)组（分别为Z=–3.815,P=0.000; Z=–4.418, P=0.000），后两者比较亦具有统计学差别（Z=–3.367,P=0.000）。肝内IL-4的表达在正常对照组、S_(0-1)组、S_(2-3)组和S_4组依次为30322.3±7260.3、791094.5±60882.8、1291570.0±355263.9、1910577.0±156621.1，呈现随肝纤维化程度加重逐渐升高的走势，各组间两两比较均有显著差别（均P0.05）。IFN-γ/IL-4比值随肝纤维化程度加重逐渐降低，在S_(0-1)组、S_(2-3)组、S_4组依次为5.13±0.53、4.39±0.50、1.64±0.12，两两比较均有统计学差别（P0.001）。CHB患者中IFN-γ/IL-4比值与肝纤维分期呈负相关（r=–0.531, P0.01）。CHB患者肝组织内IFN-γ、IL-4主要表达于汇管区淋巴细胞，部分肝细胞内可见少量阳性表达。在正常肝组织仅有少量IFN-γ表达于淋巴细胞胞浆，而IL-4几乎不表达。6Logistic逐步回归浅析发生显著肝纤维化（S_(2-4)）的危险因素将CHB患者分为轻度肝纤维化（S_(0-1)）和显著肝纤维化（S_(2-4)）两组，单因素比较显示轻度纤维化组与显著肝纤维化组之间有统计学作用的临床常规指标为年龄、性别、白蛋白、AST、TB、DB、TBA、GGT、ALKP、CHE、PT、PTA、INR、PLT，共14项。Logistic逐步回归浅析显示血清IFN-γ/IL-4比值是发生显著肝纤维化的独立危险因素之一（OR值为4.755,95%CI为1.034～21.862, P=0.045）。结论：1CHB患者外周血及肝组织内Th1/Th2比值较正常对照组显著下降，不同纤维化程度CHB患者外周血及肝组织内均有着Th1/Th2失衡，并且随肝纤维化程度进展，外周血及肝脏内均呈现Th1向Th2漂移的现象。2血清及肝组织中IFN-γ/IL-4水平比值与肝纤维分期均呈负相关，血清IFN-γ/IL-4比值是发生显著肝纤维化（S_(2-4)）的独立危险因素之一。3Th1/Th2失衡可能是CHB肝纤维化发生进展的一种机制。关键词：Th1细胞论文Th2细胞论文肝炎论文乙型论文慢性论文肝纤维化论文
摘要4-7
ABSTRACT7-12
前言12-13
材料与策略13-17
结果17-20
附图20-22
附表22-26
讨论26-30
结论30