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摘要：目的探讨脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem/stromal cells, ASCs）的直径、表面表型及向成脂诱导分化的生物学特性。策略1、细胞取材培养：脂肪组织取材于沈阳军区总医院整形外科吸脂患者，共5例。无菌条件下吸取脂肪组织，0.1%Ⅰ型胶原酶消化45min。密度梯度离心法分离细胞，得到基质血管成分（stromal vascular fraction, SVF），其中含有ASCs。接种至25cm2培养瓶,37℃、5%CO2孵箱中培养。48h后换液除去未贴壁细胞。3天换一次液，细胞达到80%~90%融合时传代。2、细胞直径检测：采取Cellometer细胞计数仪检测原代至第三代（P0至P3代）细胞直径，每次检测重复5次，实验数据结果采取平均数±标准差表示。统计浅析采取t检验。3、细胞表型检测：第3代细胞胰蛋白酶消化为单个细胞悬液，分别加入CD31、CD34、CD45、CD49d、CD105和CD106抗体各20ul，以不加抗体作为对照，避光孵育15min。200×g离心力下离心15min。PBS洗涤以去除未结合抗体，200×g离心力下离心3min，流式细胞仪检测细胞表型。4、向脂肪细胞诱导分化：P3代细胞培养48h后换成成脂诱导培养液（DMEM、10%FBS、1umol/L地塞米松、200umol/L吲哚美辛，0.5umol/L3-异丁基-1-黄嘌呤（IBMX），10ug/ml胰岛素）培养。培养7天后，油红O染色液室温染色15min，倒置显微镜下观察随机采集10张图像。分别计算视野中全部细胞与成脂细胞数，计算成脂诱导率。计算策略为：成脂诱导率=全部成脂细胞数/全部细胞数×100%。结果1、细胞形态：SVF接种于25cm2培养瓶中24~48h后出现贴壁，10天左右可铺满瓶底。传代后细胞生长速度加速，原代培养细胞一般5~7天增殖达80%融合。第一代细胞形态多样化，一部分为三角形样细胞，另一部分为梭形细胞，可见梭形细胞中间类圆形的胞质区。第二代细胞形态部分为多角形，另一部分为长梭形，二者比例相近。第三代细胞形态大部分为长梭形，胞体较宽，胞质折光性好。2、细胞直径变化：细胞未贴壁时平均细胞直径范围为9.40±1.89μm，最小细胞直径为7.45μm，最大细胞直径为29.18μm，其中76.15%细胞直径为7.45~9μm。第一代平均细胞直径为13.26±1.64μm，最小细胞直径为7.42μm，最大细胞直径为28.66μm,其中60.81%细胞直径为7.42~15μm。第二代平均细胞直径为13.66±0.97μm,最小细胞直径为7.22μm，最大细胞直径为25.65μm，其中91.67%细胞直径范围为7.22~19.07μm。第三代平均细胞直径为15.44±0.97μm,最小细胞直径为7.47μm，最大细胞直径为29.50μm，其中76.92%细胞直径范围为7.47~18.49μm。3、细胞表型检测：流式细胞仪浅析P3代细胞表面表型为CD31-CD34-CD45-CD49d+CD105+CD106-。具体检测结果CD31为0.67±0.56%,CD34为2.45±1.68%，CD45为1.19±0.61%，CD105为32.33±33.79%。CD49d31.94±14.37%，CD106为1.41±0.73%。4、成脂诱导变化和鉴定：成脂诱导48~72h后，细胞形态逐渐发生变化，由长梭形细胞变为多角形、类圆形细胞，可见胞质内出现透亮、高折光性、“分房”状的小脂滴，最初位于细胞核外周。脂滴的数量和体积随诱导时间的延长而增加变大，相互融合，最终7天后油红O染色显示有大量红色脂质沉积。同时，细胞形态以圆形为主，长梭形细胞少见。200倍倒置显微镜下随机采集10个视野计数，P3代细胞7天成脂诱导率为51.12±8.01%。结论本探讨体外分离人脂肪源性干细胞并培养，细胞于接种后24h开始贴壁，逐渐由圆形透亮细胞转变为长梭形细胞。采取Cellometer细胞计数仪证实，体外分离的细胞大小有着差别，随着培养时间延长而发生变化。流式细胞仪检测证实，第三代细胞表型为CD31-CD34-CD45-CD49d+CD105+CD106-。体外培养细胞在成脂诱导条件下可向脂肪细胞分化。关键词：脂肪源性干细胞论文细胞直径论文细胞表型论文成脂诱导论文
中文论著摘要4-7
英文论著摘要7-10
英文缩略语表10-12
前言12-13
第一部分 脂肪源性干细胞体外分离和培养的探讨13-21
材料与策略13-16
结果16-19
讨论19-21
第二部分 脂肪源性干细胞的鉴定和成脂诱导的探讨21-25
材料与策略21-22
结果22-24
讨论24-25
第三部分 全文总结25-27
本探讨革新性的自我评价27-28