摘要：杜鹃花属是杜鹃花科中最大的一个属，而我国又是杜鹃花属植物种类最丰富的国家，是世界杜鹃花属植物的主要分布中心。该属植物除了具有极高的欣赏价值外，还具有较高的药用价值，在医药、食品等具有广阔的开发运用前景。黄酮类化合物是植物中重要的次生代谢产物，而杜鹃属植物是一种优良的类黄酮潜在资源。但是目前对杜鹃各方面的探讨和开发主要是以野生品种为主，而由于对野生品种的盲目采集，导致杜鹃自然资源严重匮乏，可供利用的野生杜鹃资源越来越少，且目前对杜鹃黄酮类化合物也没有一个系统的探讨，限制了人们对杜鹃属黄酮类化合物潜在资源的进一步开发和利用。本论文以目前人工栽培非常成功的锦绣杜鹃、白杜鹃等为材料，对杜鹃中黄酮类化合物进行了系统探讨，为进一步利用栽培杜鹃的黄酮类化合物提供了重要的论述依据和技术支撑，同时也为今后黄酮类化合物扩大生产提供了资源保障。本论文主要探讨内容有：（1）将BP人工神经网络技术与传统的正交试验策略相结合对杜鹃黄酮类物质提取工艺进行优化，并对优化后杜鹃总黄酮提取液进行抑菌实验；（2）采取颜色反应、高效液相-质谱联用技术等浅析策略浅析杜鹃叶和花中黄酮类化合物的主要成分；（3）运用Hplc法，建立了同时测定杜鹃提取液中4种主要黄酮类成分的测定策略，同时，用建立的HPLC策略对锦绣杜鹃和白花杜鹃叶、枝的黄酮类主要成分含量的年动态变化进行浅析探讨；（4）探讨不同类型不同浓度的外源诱导子对杜鹃黄酮类化合物含量的累积及叶片相关酶活性的影响，选择对黄酮类化合物含量提升最适的诱导子类型和诱导子浓度。主要的探讨结果如下：1、在正交试验的基础上，运用BP人工神经网络模型确定锦绣杜鹃叶黄酮提取的最优化工艺：料液比1：20，超声波提取时间为40min，提取温度为50℃，乙醇质量分数为40%。运用优化工艺提取的总黄酮含量高于正交试验各结果，且节约了成本，降低了能耗。表明将BP人工神经网络技术与传统的正交试验策略相结合提出的试验设计和数据处理的策略是可行的，该原理和策略也可用于其他植物黄酮类物质提取工艺的优化。2、锦绣杜鹃和白杜鹃叶总黄酮提取液对青霉菌、黑曲霉等霉菌几乎无抑菌作用，对细菌则有不同程度的抑制作用，原液抑菌率都达到100%。其中对金葡萄球菌抑菌效果最好，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌次之，并且都随总黄酮提取液浓度的提升，抑菌效果增强。而白杜鹃叶总黄酮提取液的抑菌效果要好于锦绣杜鹃叶的，这可能是与其提取的总黄酮含量的高低有关。锦绣杜鹃叶总黄酮提取液的最低抑菌浓度（MIC）：金葡萄球菌抑菌和大肠杆菌为0.03125g/ml，枯草芽孢杆菌为0.0625g/ml。白杜鹃叶总黄酮提取液的最低抑菌浓度（MIC）：金葡萄球菌抑菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌均为0.03125g/ml。3、本论文用Waters C18(4.6mm×250mm，5μm)反相色谱柱，在甲醇和水的流动相梯度洗脱，洗脱程序为：0~24min，31%~42%B；24~30min，42%~50%B；30~35min，50%~60%B；35~40min，60%B；检测波长356nm，流速为0.7mL/min，柱温30℃条件下可以使锦绣杜鹃叶中的黄酮类化合物Hplc得到很好的分离效果。在HPLC分离的基础上，通过液质联用技术初步鉴定了杜鹃叶中的5个黄酮类化合物，分别是金丝桃苷、异槲皮苷、广寄生苷、槲皮苷、槲皮素。杜鹃花中的6个杜鹃花黄酮类化合物，分别为锦葵花素戊糖苷、杨梅黄素3-鼠李糖苷、槲皮素-3-半乳糖苷、槲皮素-3-O–阿拉伯糖苷、槲皮素-3-鼠李糖苷槲皮素。4、锦绣杜鹃叶总黄酮及黄酮主要成分含量的季节变化变化规律呈现出一定的相似性，黄酮含量随着春季气温回升，芽的发育，新枝叶的生长，黄酮的含量大幅度增加，在3~6月份杜鹃叶总黄酮含量均体现出较高水平，进入9月，总黄酮含量又有所回升，11月总黄酮大幅度下降。锦绣杜鹃叶四种主要黄酮类成分中槲皮苷含量最大，其次为槲皮素，最少为异槲皮苷。锦绣杜鹃枝总黄酮含量的季节性变化规律与叶有所不同，枝在进入9月份时，并没有象叶一样进入第二个黄酮的增加期，这可能与枝的含量太低，变化不显著有关，且杜鹃枝含量显著低于叶。白杜鹃枝叶总黄酮与其主要成分含量的季节性变化规律同锦绣杜鹃枝叶呈现出一定的相似性，但白杜鹃枝叶黄酮类化合物含量较高于锦绣杜鹃。5、不同浓度的SA处理，杜鹃总黄酮及主要成分含量均在处理第8天时，达到最高值。其中低浓度的SA (50μg/mL)对黄酮含量的影响最显著，高浓度的SA起抑制作用。PAL活性随着诱导子处理时间的增加而增加，且在第4天和第8天PAL活性均达到较高值，说明SA处理后，PAL活性维持较高水平的时间较长。100μg/mL浓度的SA处理，PAL活性增幅最大。50μg/mL浓度与100μg/mL浓度的SA处理后，PPO活性都有较大幅度的提升。POD活性在第4天就达到较高值，这可能与其对外界刺激作出的应激反应有关.探讨结果说明不同浓度的SA处理对POD活性都有显著提升，是提升POD活性较好的诱导子。6、一定浓度的外源MeJA诱导子处理，杜鹃总黄酮及主要成分含量的影响显著，其中高浓度的MeJA(150μg/mL)对总黄酮及主要成分含量的影响最显著，但低浓度(50μg/mL)的MeJA对杜鹃黄酮含量基本没有影响。100~200μg/mL浓度的MeJA处理后，PAL活性都显著提升，说明对杜鹃喷施100μg/mL-200μg/mL浓度范围的MeJA后可显著提升PAL酶活性。100μg/mL浓度的MeJA处理后，PPO活性提升最显著。POD活性在第4天就达到最高值，且各处理POD活性均有大幅度的提升，这说明不同浓度的MeJA处理对POD活性都有显著提升，也是提升POD活性较好的诱导子。7、不同浓度的GA3处理杜鹃植株，浓度为100μg/mL的GA3处理对杜鹃总黄酮含量的影响最显著。而高浓度的GA3（200μg/mL）对杜鹃黄酮含量基起到抑制作用。不同浓度的MeJA处理对黄酮类4种成分含量的影响不同，金丝桃苷、槲皮苷2种黄酮类成分含量提升幅度最显著的处理浓度均为100μg/mL。而异槲皮苷和槲皮素2种黄酮类成分含量提升幅度最显著的处理浓度却为150μg/mL。50μg/mL、100μg/mL浓度的GA3处理后，对PAL活性的影响较为显著，PAL活性维持较高水平的时间较长。100μg/mL浓度的GA3处理后，PPO活性提升的幅度最显著。低浓度的GA3（50μg/mL）处理后，POD活性在处理第4天后有较大幅度的提升，其余浓度的GA3处理，反而降低了叶片POD的活性。、8、不同浓度的ABA处理杜鹃植株，结果表明，浓度为150μg/mL的ABA处理对杜鹃总黄酮及主要成分含量的影响较为显著。低浓度（50μg/mL）的ABA处理，PAL活性增加幅度最大。100μg/mL浓度的ABA处理后，PPO活性提升的幅度最显著，且在处理后第12天PPO活性还保持一定的水平，对PPO活性影响最少的浓度是50μg/mL。而对POD活性影响较大的浓度则是200μg/mL和150μg/mL。而50μg/mL和100μg/mL浓度的ABA处理，POD活性反而下降。结果表明，高浓度的ABA对POD活性起到提升作用，但低浓度的ABA对POD活性反而起到一定的抑制作用。关键词：杜鹃论文黄酮类化合物论文Hplc论文液质联用论文诱导子论文酶活性论文
摘要10-13
Abstract13-17
第一章 文章综述17-44
1 探讨背景17-19
1.1 杜鹃属植物黄酮类化学成分17-18
1.2 杜鹃属植物黄酮类化合物的生物活性18-19
2 黄酮类化合物的探讨进展19-31
2.1 黄酮类化合物的生物活性19-23
2.1.1 抗氧化作用20
2.1.2 抑菌作用20-21
2.1.3 抗病毒作用21
2.1.4 抗肿瘤作用21-22
2.1.5 抗心脑血管疾病作用22
2.1.6 抗炎、镇痛、抗过敏作用22-23
2.1.7 其他作用23
2.2 黄酮类化合物的理化性质23
2.3 黄酮类化合物的特点反应23-24
2.4 黄酮类化合物的提取、分离和成分浅析24-28
2.4.1 黄酮类化合物的提取24-26
2.4.2 黄酮类化合物的分离26-28
2.4.3 黄酮类化合物的成分浅析28
2.5 黄酮类化合物的生物合成28-31
2.5.1 黄酮类化合物的生物合成途径28-29
2.5.2 黄酮类化合物合成相关酶与结构基因29-31
3 诱导子对植物次生代谢产物及相关酶活性的调控探讨31-34
3.1 诱导子的作用机制32
3.2 诱导子的作用效果32
3.3 诱导子的种类及运用32-34
3.3.1 茉莉酸甲酯（MeJA）32-33
3.3.2 水杨酸（SA））33
3.3.3 脱落酸（ABA）33
3.3.4 赤霉素（GA）33-34
4 本论文探讨的目的及作用34
1 BP 人工神经网络模型的运用49-502.2.2 对主要影响因素进行仿真和优化浅析50-52
2.3 抑菌活性探讨52-53
3 小结与讨论53-54
3.1 杜鹃叶总黄酮的提取优化工艺53
3.2 杜鹃叶总黄酮的抑菌活性53
3.3 黄酮类化合物的抑菌机制探讨53-54
化合物含量的动态变化79-812.2.1 白杜鹃叶黄酮类化合物含量的动态变化79-80
2.2.2 白杜鹃枝黄酮类化合物含量的动态变化80-81
3 小结与讨论81-82
3.1 色谱条件的优化81
3.2 锦绣杜鹃黄酮类化合物含量的动态变化浅析81
3.3 白杜鹃黄酮类化合物含量的动态变化浅析81-82
献115-117第六章 本探讨的主要革新点及探讨展望117-118
1 主要革新点117
2 进一步探讨展望117-118
附录 1 图版118-119
附录 2 缩略词119-120
附录 3 在学期间发表的文章120-121
致谢121
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