简析损伤生姜乙醇提取物有效部位对酒精诱导肝细胞损伤保护作用前言

摘要：肝脏是酒精代谢的最主要器官,其中90%-95%酒精在肝脏进行氧化代谢。长期、大量饮用各种含乙醇的饮料会造成酒精性肝病。随着我国饮酒人数的增加,酒精滥用和酒精依赖已成为我国日益严重的公共卫生不足。酒精对肝脏的损伤涉及多种机制,氧化损伤是公认的理由之一,主要体现为破坏肝脏氧化还原环境,产生大量的活性氧(ROS),脂质代谢紊乱,生物大分子氧化变性以及加合物的形成,最终导致肝细胞损伤。生姜(ginger)作为药用,具有悠久的历史。现代探讨表明,生姜具有抗氧化和调节血脂等多种功效,有利于肝病的预防和转归；而姜辣素作为生姜的辣味成分,已证明具有多种生物学活性：抗炎、抗氧化、抗诱变、降血脂、抗动脉粥样硬化和抗肿瘤等等。本课题利用姜辣素具有抗氧化活性来探讨其对酒精性肝细胞损伤的保护作用。目的：本课题以姜辣素为指标,利用大孔树脂对生姜乙醇提取物(后称初提物)进一步分离纯化,筛选出抗氧化活性最有效部位,并探讨其对酒精导致的肝细胞损伤的预防和保护作用。策略：一初提物极性部位分离纯化：选用AB-8大孔树脂作为固定相,不同浓度乙醇溶液作为洗脱液对初提物进行分离纯化,得到：水相、25%乙醇相、50%乙醇相、75%乙醇相和95%乙醇相5个不同极性部位。二初提物和各分离部位姜辣素含量的测定与比较：选择紫外可见分光光度法,以香草醛作为标准品绘制标准曲线,测量并比较姜辣素的含量。三初提物和各分离部位的体外抗氧化活性比较及筛选：在体外诱导小鼠肝匀浆发生脂质过氧化反应,比较初提物及各分离部位对肝匀浆生成MDA的抑制率,并与维生素E进行比较；运用SOD试剂盒测定各极性分离部位的类SOD活性；综合各部位姜辣素含量和体外抗氧化活性,得到生姜乙醇提取物有效部位(后称有效部位)。四酒精对肝细胞抗氧化系统的影响以及有效部位对肝细胞的保护作用：①建立肝细胞氧化损伤模型：以原代小鼠肝细胞为探讨对象,用含不同浓度酒精的培养基培养,作用不同时间,测定细胞培养液中LDH、AST水平,细胞中MDA、GSH和SOD活性。观察酒精对肝细胞氧化损伤的时间剂量效应联系。⑦姜辣素对酒精诱导肝细胞氧化损伤的保护作用：根据氧化损伤模型参数,在利用酒精作用肝细胞前,用有效部位对肝细胞预处理,观察其对肝细胞保护的时间—剂量效应联系,以而确定姜辣素对肝细胞氧化损伤的保护作用。结果：实验测得各部位姜辣素含量分别为：初提物含6.4%,水相含1.3%,25%乙醇相含11.5%,50%乙醇相含34.7%,75%乙醇相含32.3%,95%乙醇相含28.5%：其中50%乙醇相姜辣素含量最高。对MDA的抑制率、类SOD活性方面,50%乙醇相优于其它各相,即50%乙醇相为抗氧化活性有效部位。酒精对肝细胞的损伤程度与其浓度以及作用时间呈正相关。随着酒精浓度和作用时间的增加,肝细胞活力下降,脂质过氧化程度不断加重,细胞内抗氧化酶活力不断下降,酒精浓度为100mmol/L以及作用8h时,影响程度最显著。姜辣素能有效降低酒精诱导的肝细胞氧化损伤。在酒精作用前,预先给予有效部位进行干预,可显著减轻酒精所致的GSH消耗、SOD失活和脂质过氧化程度,提升细胞的活力。关键词：有效部位论文姜辣素论文酒精论文氧化损伤论文

摘要2-4

Abstract4-10

前言10-18

1 选题依据10-13

1.1 生姜及其提取物的抗氧化作用11

1.2 酒精对肝细胞的氧化损伤11-12

1.3 原代肝细胞培养及其运用12-13

1.3.1 原代肝细胞培养在药物代谢和毒理学探讨中的运用12-13

1.3.2 原代肝细胞培养的制备策略13

2 探讨内容和技术路线13-15

2.1 探讨内容14

2.2 技术路线14-15

4.3 样吕供试液制作25-26

1.4.4 样品姜辣素含量的测定26

2 结果26-28

2.1 香草醛标准曲线26

2.2 生姜乙醇提取物中姜辣素含量26

2.3 各分离部位姜辣素含量26-27

2.4 提取物与各分离部位姜辣素含量的比较27-28

3 讨论28-29

影响的剂量效应49

2.2.2 酒精对肝细胞脂质过氧化水平影响的时间效应49-51

2.3 酒精对肝细胞抗氧化酶水平的影响51-53

2.3.1 不同浓度的酒精刺激对肝细胞GSH、SOD水平的影响51-52

2.3.2 不同时间的酒精刺激对肝细胞GSH、SOD水平的影响52-53

3 讨论53-55