试议因子益智健脑颗粒对AD模型大鼠海马区Nrf2和8isoPGF2α表达影响

摘要：目的：探讨补肾活血复方益智健脑颗粒对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)模型大鼠学习记忆能力以及对核因子NF-E2相关因子(nuclear factor-erythroid2-related factor2, Nrf2)和8-异构前列腺素F2a (8-iso-prostaglandin F2a,8-iso-PG F2a)表达的影响,以而探讨中药益智健脑颗粒防治阿尔茨海默病的部分作用机理。策略：将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为正常组(n=10)、检测手术组(n=10)、模型组(n=10)、补肾活血组(n=10)。模型组和补肾活血组大鼠采取D-半乳糖腹腔注射复合双侧海马CA1区注射p淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)造模,检测手术组双侧海马CA1区注射等体积的双蒸水,正常组不作任何处理。造模后行Morris水迷宫试验(Morris water maze test, MWM)观察造模是否成功。造模成功后补肾活血组予补肾活血复方益智健脑颗粒浓缩液灌胃治疗8周,余3组大鼠均灌胃等体积双蒸水对照,治疗后再次进行Morris水迷宫试验,观察各组大鼠学习记忆能力的转变,最后断头处死大鼠取双侧海马组织,分别采取RT-PCR和ELISA检测海马组织中Nrf2和8-iso-PG F2α的表达水平。结果：1.行为学检测结果：Morris水迷宫实验中,模型组、补肾活血组大鼠逃避潜伏期较正常组大鼠逃避潜伏期时间显著延长(P0.05),停留在原平台象限的时间和穿越原平台次数较正常组大鼠显著减少(P0.05),而经过中药干预后的补肾活血组与模型组相比,能够显著缩短大鼠的逃避潜伏期(P0.05),增加其停留在原平台象限的时间和穿越原平台次数(P0.05),这说明补肾活血方能有效的改善AD模型大鼠的学习、记忆能力。2.RT-PCR结果：模型组与正常组相比较,模型组Nrf2表达显著降低(P0.05),而检测手术组则无统计学作用(P0.05)；补肾活血组与模型组相比较,补肾活血组Nrf2表达显著增加(P0.05)。3.ELISA结果：模型组与正常组相比较,模型组中8-iso-PG F2α表达显著增加,而检测手术组则无统计学作用(P0.05)；补肾活血组与模型组相比较,补肾活血组8-iso-PG F2α表达下降。结论：1.D-半乳糖腹腔注射复合双侧海马注射β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)造模可成功制备理想的AD模型。2.补肾活血复方益智健脑颗粒可显著改善AD模型大鼠的学习记忆能力。3.益智健脑颗粒可以上调Nrf2的表达以及降低8-iso-PG F2α的表达,减轻机体氧化应激作用,实现其对AD的治疗。4.AD模型大鼠脑内Nrf2及8-iso-PG F2α表达变化,可能为AD发病的部分机制。关键词：益智健脑颗粒论文阿尔茨海默病论文8-异构前列腺素F2α论文核因子NF-E2相关因子论文

摘要4-6

ABSTRACT6-9

缩略词9-12

前言12-16

第一章 AD模型大鼠的行为学检测16-21

1 材料与策略16-18

1.1 材料16-17

1.1.1 仪器与设备16

1.1.2 试剂16

1.1.3 实验动物16

1.1.4 实验药物16

1.1.5 实验动物分组16

1.1.6 动物模型制备16-17

1.1.7 实验动物灌胃17

1.2 实验策略17-18

1.2.1 行为学测试17-18

1.3 统计浅析18

2 结果18-21

2.1 行为学测试结果18-21

2.1.1 大鼠造模后Morris实验结果18-19

2.1.3 大鼠中药治疗干预后Morris实验结果19-21

第二章 益智健脑颗粒对AD模型大鼠海马区NRF2和8-ISO-PG F2A表达的影响21-40

第一部分：RT-PCR检测NRF2的表达21-27

一、材料与策略21-22

二、实验策略22-25

1.逆转录-聚合酵链(RT-PCR )的策略检测Nrf2及内参GAPDH mRNA的表达22-25

1.1 PCR引物22

1.2 RNA提取22

1.3 总RNA定量22-24

1.3.1 实验原理22-23

1.3.2 实验步骤23

1.3.3 实验数据浅析23-24

1.4 反转录(20ML系统)24

1.5 聚合酶链反应(PCR)(25ML系统)24-25

1.6 PCR产物琼脂糖凝胶电泳25

1.7 统计浅析25

三、实验结果25-27

第二部分：ELISA检测8-ISO-PG F2A的表达27-32

一、材料与策略27-29

1.实验药物27

2.动物分组喂养与灌胃以及标本采集27

3.实验原理27

4.实验材料及注意事项27-29

4.1 试剂盒组成27-28

4.2 自备物品28

4.3 试剂准备28

4.4 洗板策略28

4.5 标本处理及保存28

4.6 操作注意事项28-29

5.实验步骤29

二、实验结果29-32

1、绘制标准曲线29-30

1.1 标准曲线检测结果29-30

1.2 标准曲线图与直线回归方程式30

1.3 标准曲线方程30

2、各组大鼠海马组织8-iS0-PGF2a表达的比较30-32

第三部分 讨论32-40

1、动物模型的选择32

2、行为学检测32-33

3、中医对阿尔茨海默病的认识33-35

4、NRF2与AD的联系35-37

5、8-ISO-PGF2A与AD的联系37-40

第三章 结论40-41