柳蚕卵黄原蛋白基因克隆和表达

摘要3-4

Abstract4-9

1 文献综述9-13

1.1 昆虫卵黄原蛋白研究进展9-13

1.1.1 昆虫卵黄原蛋白的结构与特性9-10

1.1.2 昆虫卵黄原蛋白基因的合成10-11

1.1.3 昆虫卵黄原蛋白基因的摄取11

1.1.4 昆虫卵黄原蛋白基因的调控11-13

2 引言13-15

2.1 研究的目的及13-14

2.2 主要研究内容14

2.2.1 柳蚕卵黄原蛋白基因序列的测定14

2.2.2 柳蚕卵黄原蛋白转录的研究14

2.2.3 柳蚕卵黄原蛋白表达的研究14

2.3 技术路线14-15

3 与方法15-26

3.1 实验15

3.2 仪器与试剂15-18

3.2.1 主要实验仪器15

3.2.2 主要生化试剂15-16

3.2.3 常用溶液的配置16-18

3.3 实验方法18-26

3.3.1 柳蚕的饲养18

3.3.2 柳蚕组织的18

3.3.3 柳蚕基因组DNA的提取18-19

3.3.4 柳蚕总RNA的提取19

3.3.5 提取的基因组DNA及总RNA的质量检测19

3.3.6 柳蚕卵黄原蛋白基因的PCR扩增19-21

3.3.7 PCR扩增后目的产物的纯化21

3.3.8 感受态细胞的制备21-22

3.3.9 目的片段的连接和转化22

3.3.10 柳蚕卵黄原蛋白基因序列的拼接与分析22

3.3.11 柳蚕卵黄原蛋白小亚基的原核表达22-24

3.3.11.1 链cDNA的合成22-23

3.3.11.2 柳蚕卵黄原蛋白小亚基全长cDNA的扩增23

3.3.11.3 原核表达载体的构建23-24

3.3.11.4 菌液的诱导表达24

3.3.11.5 SDS-PAGE电泳检测24

3.3.12 Western blot分析24-25

3.3.13 柳蚕卵黄原蛋白转录的研究25-26

3.3.13.1 总RNA的提取25

3.3.13.2 半定量RT-PCR25-26

4 结果26-40

4.1 柳蚕的饲育与观察26-27

4.2 柳蚕基因组DNA及总RNA的检测27-28

4.3 链cDNA浓度的测定28

4.4 柳蚕卵黄原蛋白基因PCR扩增结果28

4.5 柳蚕卵黄原蛋白基因序列的测定和分析28-34

4.6 柳蚕卵黄原蛋白基因转录的研究34-36

4.6.1 PCR扩增条件的确定34-35

4.6.2 柳蚕卵黄原蛋白不同时期的表达35-36

4.6.3 柳蚕卵黄原蛋白不同组织的表达36

4.7 原核表达载体的构建36-38

4.7.1 柳蚕卵黄原蛋白小亚基的扩增36-37

4.7.2 双酶切鉴定37-38

4.8 柳蚕卵黄原蛋白小亚基的诱导表达38

4.9 Western blot检测38

4.10 不同条件下的原核表达38-40

4.10.1 IPTG不同诱导浓度的原核表达38-39

4.10.2 IPTG不同诱导时间的原核表达39-40

5 讨论40-43

5.1 柳蚕的饲养40

5.2 柳蚕卵黄原蛋白基因的一级结构40-41

5.3 半定量PCR41-42

5.4 柳蚕卵黄原蛋白小亚基的原核表达42-43

6 43-44