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摘要：目的：血管平滑肌细胞（vascular ooth muscle cells, VCs）迁移是动脉粥样硬化病变进展的一个关键因素，也是冠状动脉血管成形术后再狭窄等心血管疾病的主要病理基础。血小板源性生长因子（platelet-derivedgrowth factor, PDGF）是血管平滑肌细胞的强效促丝裂原和趋化剂，在细胞迁移中发挥重要的诱导作用。黄芩苷（baicapn）是一种草本衍生的黄酮类化合物，具有广泛的生物活性，包括消炎、抗氧化、抗增殖活性以及强大的心脏保护作用。以往探讨发现，黄芩苷对血管平滑肌细胞的增殖具有显著的抑制作用，但对细胞迁移的影响尚不清楚。平滑肌22alpha (ooth muscle22alpha, 22α)是血管平滑肌细胞的分化标志基因，可抑制VCs由分化型向去分化型的转化和增殖。另有探讨显示，22α可通过抑制迁移相关蛋白，基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达而阻止肿瘤转移。基于上面陈述的发现，本探讨探讨黄芩苷在体内、外对VCs迁移的影响以及22α在该历程中的作用。策略与结果：1PDGF-BB诱导VCs片状伪足形成和迁移分别用不同浓度(20ng/ml、50ng/ml) PDGF-BB刺激静息期VCs不同时间点（0、2、5、10、30min），利用TRITC-鬼笔环肽标记细胞骨架，激光共聚焦显微镜观察显示，PDGF-BB刺激5-10min时，VCs均有显著的片状伪足形成。2黄芩苷抑制PDGF-BB诱导的VCs片状伪足形成用黄芩苷预处理VCs后，显著抑制PDGF-BB诱导VCs的片状伪足形成。PDGF-BB可激活Ras-ERK轴，黄芩苷抑制了这一历程。3黄芩苷抑制球囊损伤诱导的MMP-9的表达MMP-9免疫组织化学染色结果显示：球囊损伤14d后血管新生内膜中可见大量棕色颗粒和阳性染色的细胞数，而黄芩苷能够显著抑制球囊损伤诱导的新生内膜的形成及MMP-9的表达，与损伤组相比阳性染色的细细胞数和棕色颗粒显著减少。422α通过抑制PDGF-BB激活的Ras-ERK轴进而抑制片状伪足的形成用特异性siRNA敲低内源性22α表达，则增强PDGF-BB诱导的VCs片状伪足形成。进而，用22α重组腺病毒表达载体感染VCs，Western blot结果显示，过表达22α能抑制Ras-ERK的活性，而敲低22α能推动Ras-ERK的激活，GTP-Ras和p-ERK水平显著高于对照组。提示22α通过抑制PDGF-BB激活的Ras-ERK轴进而抑制了片状伪足的形成。5黄芩苷抑制PDGF-BB诱导的22α的磷酸化基于22α S181位丝氨酸是其潜在的磷酸化位点，本探讨构建了22α S181突变体S181A和强制磷酸化突变体S181D。结果显示，VCs中过表达S181A抑制了PDGF-BB引起的片状伪足的形成及细胞迁移，Ras-ERK轴的活性也受抑，提示22α磷酸化介导了PDGF-BB诱导的VCs片状伪足的形成和迁移。黄芩苷可通过抑制PDGF-BB诱导的22α磷酸化，以而抑制VCs迁移。结论：1黄芩苷抑制PDGF-BB诱导VCs片状伪足的形成。222α可通过抑制Ras-ERK轴的活性而抑制PDGF-BB诱导的VCs片状伪足的形成。3黄芩苷通过抑制22α磷酸化和MMP-9的表达以而抑制VCs迁移和新生内膜形成。关键词：黄芩苷论文血管平滑肌细胞论文片状伪足论文迁移论文22α论文
中文摘要4-6
英文摘要6-9
前言9
材料与策略9-14
结果14-18
附图18-25
讨论25-27
结论27