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摘要：椎间盘退变是导致颈及腰背痛的常见理由。椎间盘是人体最大的缺氧组织，除了纤维环外层有血供分布外，纤维环内层及髓核无血管分布，髓核细胞所需营养物质需要通过终板软骨自椎体向髓核弥散渗透。随着年龄增加，终板软骨细胞衰老凋亡，细胞外基质合成减少，降解加速，软骨下椎体骨质增生钙化，导致弥散功能降低，不仅阻碍了椎间盘髓核所需要营养物质，如糖及氧份，同时使代谢废物如乳酸的排泄收到抑制，加重了椎间盘这个人体最大缺氧组织的营养障碍，加速并推动了椎间盘的退变。尽管椎间盘退变的确切分子机制尚不完全清楚，但是毫无疑问终板软骨细胞的退变，终板通透性降低，在椎间盘的退变历程中发挥了重要作用。由此，预防并降低终板软骨细胞的退变成为阻止椎间盘退变的潜在靶点。2003年KT Howitz和Sinclair等[1]首次发现并报道白黎芦醇，其属于sirtuin激活复合物(sirtuin activating compounds，STACs)，而且在一系列多酚类物质对SIRT1的作用活性检测中，白黎芦醇的激活作用最强。以此Res作为SIRT1的激活因子，被广泛运用到科学探讨当中。众多学者[2-6]证实，SIRT1是哺乳动物延缓衰老、延长寿命的关键分子，在细胞周期、代谢、分化等方面发挥广泛调节作用。Dvir-Ginzberg等[7]证实人关节软骨细胞的SIRT1高表达能够推动软骨细胞外基质基因Aggrecan， collagen2a(α1) and2b(α1)， collagen9(α1)的表达。Gagarina VG等[8]证实骨性关节炎患者SIRT1可抑制软骨细胞凋亡。既往探讨表明[9-11]，IGF-1可显著地推动多种来源的关节软骨细胞分裂增殖和软骨基质的合成，刺激软骨细胞合成软骨基质特异型蛋白－II型胶原和蛋白多糖，增强成骨细胞的碱性磷酸酯酶的活性。本探讨首先探讨了不同浓度及时间的白藜芦醇对退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1的影响，为后续探讨提供参考；其次通过SIRT1特异性siRNA及SIRT1酶活性抑制剂尼克酰胺的阻断作用，探讨了白藜芦醇推动细胞外基质合成的作用及其与SIRT的联系；并通过IGF-1R/T通路特异性抑制剂的阻断作用，探讨了白藜芦醇在退变的终板软骨细胞中推动细胞外基质合成的作用与IGF-1R/T通路的联系；以而阐明了白藜芦醇对退变椎间盘终板软骨细胞抑制退变的作用及其信号通路。1白藜芦醇对退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1表达的影响目的探讨不同浓度及时间的白藜芦醇对退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1的影响。策略老年患者的终板软骨细胞培养、传代， P2代细胞随机分组，分别用不同浓度及作用时间的白藜芦醇干预，终止培养后检测SIRT1蛋白及SIRT1mRNA表达水平。结果与空白对照组相比较，白藜芦醇能够显著推动退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白的最低条件为12.5μmol/L干预24小时，以及50μmol/L干预12小时（P0.05）；能够显著上调SIRT1基因转录水平的最低条件为12.5μmol/L干预作用48小时，以及50μmol/L干预24小时（P0.05）；在上面陈述的浓度、时间组合条件之上，白藜芦醇的作用呈现浓度、时间依赖性。结论白藜芦醇可显著推动退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平，且该作用呈现浓度、时间依赖联系。2白藜芦醇通过SIRT1途径推动退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质目的探讨白藜芦醇干预对退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1的影响及其与细胞外基质合成的联系。策略老年腰椎间盘突出症患者的终板软骨细胞培养、传代， P2代细胞随机分为5组，即白藜芦醇组、二亚砜对照组、白藜芦醇+尼克酰胺组、白藜芦醇+siRNA转染组及空白对照组。各组进行对应处理后检测SIRT1、COLA2、aggrecan及SIRT1mRNA表达水平。结果白藜芦醇干预上调退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1基因的转录水平及SIRT1蛋白的表达水平，推动细胞外基质（COLA2、aggrecan）的合成；Nam及siRNA干预分别有效抑制了SIRT1酶活性及SIRT1mRNA的表达，并抑制了细胞外基质的合成。结论白藜芦醇可推动退变椎间盘终板软骨细胞合成软骨细胞外基质成分（Ⅱ型胶原、aggrecan），抑制椎间盘软骨终板退变，其机制与调节SIRT1基因转录及SIRT1酶活性有关。3白藜芦醇通过IGF-1R/T通路推动退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质目的探讨IGF-1R/T信号通路在白藜芦醇推动椎间盘软骨终板细胞合成细胞外基质的影响（Ⅱ型胶原及aggrecan）。策略椎间盘软骨终板细胞培养，传代，P2代细胞培养12h后，随机分为5组，各组加入对应试剂培养12h后终止培养，检测IGF-1R、pIGF-1R、T、pT、COLAII、aggrecan的表达变化。结果白藜芦醇干预后IGF-1R及T磷酸化水平显著增加，COLAII、aggrecan表达显著增加；分别加入AG1024及SH-5则显著抑制了胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）及蛋白激酶B（T）磷酸化激活，COLAII、aggrecan表达显著下降。结论白藜芦醇可推动椎间盘软骨终板细胞表达软骨细胞外基质，抑制软骨终板退变，其机制与调节IGF-1R/T通路活性有关。关键词：白藜芦醇论文SIRT1/IGF-1R/T论文退变论文终板论文细胞外基质论文
英汉缩略语名词对照6-8
中文摘要8-12
英文摘要12-16
前言16-20
第一章 白藜芦醇对退变椎间盘终板软骨细胞 SIRT1 表达的影响20-47
1 材料21-26
2 策略26-33
3 结果33-40
4. 结论40
5. 讨论40-45
小结45-47
第二章 白藜芦醇通过 SIRT1 途径推动退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质47-68
1 材料48-53
2 策略53-56
3. 结果56-64
4. 结论64
5. 讨论64-66
小结66-68
第三章 白藜芦醇通过 IGF-1R/T 通路推动退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质68-86
1. 材料69-74
2 策略74-76
3 结果76-83
4. 结论83
5. 讨论83-85
小结85-86
全文总结86-87
综述87-101