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弧菌运用噬菌体防治弧菌引发刺参腐皮综合征

收藏本文 2024-01-31 点赞:12256 浏览:48402 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:刺参腐皮综合征是目前刺参养殖最常见、危害最为严重的疾病之一,严重制约了刺参养殖业的持续健康进展。当前刺参腐皮综合征的防治主要依赖于化学消毒剂和抗生索,长期利用会引发药物残留、病原菌产生耐药性和水体环境污染等不足。本探讨探讨运用裂解性噬菌体防治刺参腐皮综合征,为刺参的健康养殖提供一条新途径。以大连地区患腐皮综合征的剌参体壁组织中,采取平板分离技术分离细菌。纯化培养后,通过人工回接感染实验验证分离的菌株是否为刺参腐皮综合征的病原菌。利用形态学观察、生理生化指标及16S rDNA序列浅析对病原菌进行分类鉴定。分离得到两株弧菌VDL-1和VDL-2,人工回接感染实验中,患病刺参的症状与自然发病的症状相同,说明VDL-1和VDL-2是刺参腐皮综合征的病原菌,且VDL-2的致病力比VDL-1强。细菌VDL-1和VDL-2均无荚膜,具有极生单鞭毛,短杆状,两端钝圆。VDL-1和VDL-2的L-苯丙氨酸、PNP-磷酸盐和甘氨酸生理生化指标不同。经分类鉴定,VDL-1为嗜环弧菌(Vibrio cycptrophicus), VDL-2为塔斯马尼亚弧菌(Vibrio taaniensis)。将已分离的病原菌作为宿主菌,采取双层平板法以养殖海水中分离噬菌体,对噬菌体进行透射电镜观察,表征氯仿敏感性、宿主谱、潜伏期、裂解量等噬菌体生物特性。通过测定细菌与噬菌体共培养物在600nm处的吸光值来考察噬菌体对病原菌的体外裂解效果。筛选得到裂解VDL-1的噬菌体PVDL-1, PVDL-1属于长尾噬菌体科,感染宿主菌的潜伏期约35min,裂解量约218PFU/cell。筛选得到VDL-2的裂解性噬菌体PVDL-2, PVDL-2属于肌尾噬菌体科,感染宿主菌的潜伏期约30min,裂解量约110PFU/cell。 PVDL-1和PVDL-2宿主专一性强,均对氯仿不敏感。在体外,PVDL-1对VDL-1有很好的裂解作用,PVDL-2与VDL-2共培养6h后,VDL-2产生抗PVDL-2的抗性菌株。噬菌体治疗实验采取浸浴的给药方式。通过比较阴性对照组、阳性对照组、噬菌体预防性实验组和噬菌体治疗性实验组刺参的存活率,评价噬菌体防治刺参腐皮综合征的效果。PVDL-1两噬菌体治疗组可将刺参存活率由45%提升到90%以上;PVDL-2预防性和治疗性实验组可将刺参存活率以0%分别提升到95%和55%。噬菌体预防性实验组的疗效优于噬菌体治疗组。体外及噬菌体治疗实验表明,噬菌体PVDL-1和PVDL-2具有制成噬菌体生物制剂防治刺参腐皮综合征的潜质。关键词:刺参论文腐皮综合征论文噬菌体疗法论文嗜环弧菌论文塔斯马尼亚弧菌论文

    摘要4-5

    Abstract5-10

    引言10-11

    1 文献综述11-25

    1.1 刺参介绍11-13

    1.1.1 刺参的营养和药用价值11

    1.1.2 中国刺参养殖业的进展近况及不足11-12

    1.1.3 刺参腐皮综合征12-13

    1.2 噬菌体介绍13-19

    1.2.1 噬菌体探讨的进展历程13-14

    1.2.2 噬菌体生物学14-17

    1.2.3 噬菌体的分类17-18

    1.2.4 噬菌体在生物技术领域中的运用18-19

    1.3 噬菌体治疗介绍19-23

    1.3.1 噬菌体治疗的进展历程19-20

    1.3.2 噬菌体治疗的优缺点20-21

    1.3.3 噬菌体治疗在水产中的运用21-22

    1.3.4 噬菌体治疗展望22-23

    1.4 本论文探讨作用23-24

    1.5 本论文探讨思路24-25

    2 病原菌的分离与鉴定25-38

    2.1 引言25

    2.2 实验用品25-26

    2.2.1 实验样品25

    2.2.2 实验试剂25

    2.2.3 实验仪器与设备25-26

    2.2.4 试剂的配制26

    2.3 实验策略26-29

    2.3.1 病原菌的分离26-27

    2.3.2 病原菌的保藏27

    2.3.3 人工回接感染实验27

    2.3.4 病原菌的分类鉴定27-29

    2.4 实验结果29-36

    2.4.1 病原菌的分离29-30

    2.4.2 人工回接感染实验30-32

    2.4.3 病原菌的分类鉴定32-36

    2.5 讨论36-37

    2.5.1 刺参腐皮综合征病原菌36

    2.5.2 弧菌、嗜环弧菌、塔斯马尼亚弧菌36-37

    2.6 小结37-38

    3 裂解性噬菌体的筛选与性质浅析38-53

    3.1 引言38

    3.2 实验用品38-39

    3.2.1 实验样品38

    3.2.2 实验试剂38

    3.2.3 实验仪器与设备38-39

    3.2.4 试剂的配制39

    3.3 实验策略39-43

    3.3.1 裂解性噬菌体的筛选与纯化39-41

    3.3.2 噬菌体透射电镜观察41

    3.3.3 氯仿敏感性测试41-42

    3.3.4 宿主谱42

    3.3.5 噬菌体一步生长曲线42

    3.3.6 噬菌体对病原菌的体外裂解42-43

    3.4 实验结果43-49

    3.4.1 裂解性噬菌体的筛选与纯化43-44

    3.4.2 噬菌体透射电镜观察44

    3.4.3 氯仿敏感性测试44-45

    3.4.4 宿主谱45

    3.4.5 噬菌体一步生长曲线45-46

    3.4.6 噬菌体对病原菌的体外裂解46-49

    3.5 讨论49-51

    3.5.1 噬菌体PVDL-1和PVDL-2分类49

    3.5.2 氯仿敏感性49

    3.5.3 细菌对噬菌体产生抗性49-51

    3.6 小结51-53

    4 噬菌体防治刺参腐皮综合征的效果评价53-61

    4.1 引言53

    4.2 实验用品53-54

    4.2.1 实验样品53

    4.2.2 实验试剂53

    4.2.3 实验仪器与设备53-54

    4.3 实验策略54-55

    4.3.1 浓缩噬菌体颗粒54-55

    4.3.2 噬菌体治疗实验55

    4.4 实验结果55-58

    4.4.1 噬菌体PVDL-1治疗实验55-56

    4.4.2 噬菌体PVDL-2治疗实验56-58

    4.5 讨论58-60

    4.5.1 内毒素58

    4.5.2 给药方式58-59

    4.5.3 噬菌体预防性和治疗性实验59

    4.5.4 免疫应答59-60

    4.5.5 运用裂解性噬菌体防治刺参腐皮综合征展望60

    4.6 小结60-61

    结论61-62

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